Кинетические параметры аминоацилирования тРНКТуr-транскрипта тирозил-тРНК синтетазой из печени быка

Abstract

Полноразмерная тирозил-тРНК синтетаза из печени быка и тирозил-тРНК синтетаза с делецией С-концевого некаталитического домена экспрессированы в бактериальной системе. Для двух форм фермента проведено сравнение кинетических констант реакции аминоацилирования. Показано, что каталитическая эффективность в тирозилировании природной тРНКТуr и тPHKTyr-транскрипта с удалением С-концевого домена снижается в 4 и 18 раз соответственно. Отмечено, что при аминоацилировании тРНКТуr-транскрипта снижение каталитической эффек­тивности связано в основном с увеличением Км. Высказано предположение о том, что роль С-концевого домена в аминоацилировании состоит в повышении прочности связывания тРНКТуr.

The full-length tyrosyl-tRNA synthetase from bovine liver and its truncated form without the C-terminal noncatalytic domain were expressed in a bacterial system. Both enzymes have been compared in respect of the aminoacylation kinetic constants. It has been shown that the catalytic efficiency of the yeast tRNATyr and tRNATyr transcript tyrosylation upon deletion of the C-terminal domain decreases by factors of 4 and 18 respectively. The catalytic efficiency decrease in the tRNATyr transcript tyrosylation is mainly due to the increasing of K.w We suggest that the C-terminal domain improves the aminoacylation activity of tyrosyl-tRNA synthetase by strengthening tRNA binding.

Повнорозмірна тирозил-тРНК синтетаза з печінки бика і тирозил-тРНК синтетаза з делецією С-кінцевого некаталітичного домену експресовані в бактеріальній системі. Для двох форм ферменту здійснено порівняння кінетичних кон­стант реакції аміноацилювання. Показано, що каталітична зфективність у тирозилюванні природної тРНKTyr, та тРНKTyr-транскрипта з видаленням С-кінцевого домену зни­жується в 4 і 18 разів відповідно. Відмічено, що при аміно-ацилюванні тРНК Tyr-транскрипта зниження каталітичної зфективності пов'язане головним чином зі збільшенням Км. Зроблено припущення, що роль С-кінцевого домену в аминоацилюванні полягає в підсиленні зв'язування тРНК з ферментом.