Отримання стійких до спектиноміцину/стрептоміцину клітинних ліній Brassica oleracea (+ Arabidopsis thaliana) та Brassica napus після генетичної трансформації пластому

Abstract

Генетическую трансформацию пластид Arabidopsis thaliana и Brassica napus проводили с помощью методов полиэтиленгликолем-обработки протопластов соматических гибридов B. oleracea с хлоропластами A. thaliana и бомбардировки микрочастичками вольфрама регенерационно активного каллуса B. napus сорта Westar. В экспериментах использовали генетическую конструкцию pCB040, которая содержит ген устойчивости к спектиномицину/стрептомицину (aadA) в пределах последовательностей, гомологичных trnV-rps7 области пластома рапса. Селекцию транспластомных каллусных линий проводили по способности расти на среде с высокими концентрациями спектиномицина и стрептомицина. Устойчивые к антибиотикам клеточные линии получили после использования обоих методов трансформации. С помощью метода ПЦР показали присутствие гена aadA в пластоме A. thaliana и B. napus для двух каллусных линий B. oleracea (+A. thaliana) и трех линий B. napus соответственно.

Plastid genetic transformation has been performed using both the PEG-treatment of protoplasts of somatic hybrids of B. oleracea carrying A. thaliana chloroplasts and the particle bombardment of regenerable calluses of B. napus sv. Westar. The chloroplast transformation vector pCB040 carried resistance (aadA) gene flanked by rapeseed plastid DNA sequences to target its insertion between the trnV-rps7 fragments. Selection of transplastomic cell lines has been performed according to their ability to grow on the medium supplied with spectinomycin and streptomycin in high concentrations. Antibiotic resistant cell lines have been obtained using the both transformation methods. The presence of the aadA gene in the A. thaliana and B. napus plastomes was confirmed by PCR analysis for two cell lines of B. oleracea (+A. thaliana) and three lines of B. napus.