Векторы для клонирования и определения активности элементов транскрипционной системы бактерий. Клонирование терминатора транскрипции оперона рРНК из архебактерий Halobacterium halobium

Abstract

Сконструированы рекомбинантные плазмиды рММ24 и pVR41, содержащие промоторный район Pᵣ бактериофага λ с областями инициации транскрипции и инициации трансляции репрессора λсrо, полилинкер и участок терминации транскрипции бактериофага fd. Показано, что в клетках Е. coli синтезируются короткие гибридные мРНК, кодируемые мини-геном. Встраивание в полилинкерную последовательность мини-гена других структур, терминирующих транскрипцию (например, предполагаемого терминатора транскрипции оперона рРНК H. halobium), приводит к образованию в клетках Е. coli гибридных РНК соответствующей длины, экспрессию которых можно наблюдать при выращивании бактерий на среде с радиоактивным предшественником.

Сконструйовано рекомбінантні плазміди рММ24 і pVR41, які містять промоторний район Pᵣ бактеріофага λ з областями ініціації транскрипції і ініціації трансляції репресора λсrо, полілінкер і ділянку термінації транскрипції бактеріофага fd. Показано, що в клітинах Е. coli синтезуються короткі гібридні мРНК, які кодуються міні-геном. Вбудовування в полілінкерну послідовність міні-гена інших структур, термінуючих транскрипцію (наприклад, передбачуваного термінатора транскрипції оперона рРНК H. halobium), призводить до утворення в клітинах Е. coli гібридних РНК відповідної довжини, експресію яких можна спостерігати при вирощуванні бактерій на середовищі з радіоактивним попередником.

The pBR322 vector was used for constructing recombinant plasmids pMM24 and pVR41, containing the promoter region Pᵣ of the bacteriophage λ including the transcription and translation starting points of the cro-repressor, the polylinker with the restriction sites for several restrictases and the tandem of the terminators of the fd phage. The constructed mini-gene is transcribed in E. coli cells into the corresponding mini-mRNA. The transcription of this gene could occur either constitutively or under the conduction of the c1857 represser of the phage λ. The polylinker sequence in the gene body could be used to introduce various regulator structures between the promoter and the terminators. A putative transcription terminator of the rRNA operon from the archaebacterium H. halobium was cloned inside the mini-gene. This archaebacterial sequence was shown to function as an effective terminator in the eubacterial system.