Метод быстрой трансформации энтеробактерий и некоторые факторы, влияющие на его эффективность

Abstract

Описаны две модификации метода замораживания-оттаивания для трансформации энтеробактерий: стандартная и упрощенная. Первая позволяет в течение 1 ч трансформировать Escherichia coli IM109 и Klebsiella oxytoca VN13 с эффективностью до 2,5·10⁵ трансформантов на 1 мкг ДНК. Вторая дает возможность за 5 мин трансформировать эти штаммы с эффективностью 1·10⁴ трансфорцантов на 1 мкг ДНК. Модификации были успешно использованы для трансформации Enterobacter cloaceae ССМ1902, Е. aerogenes ССМ2531 и Erwihia carotovora subsp. carotovora ИМВ8351.

Описано дві модифікації методу заморожування – відтавання для трансформації єнтеробактерій: стандартна та спрощена. Перша дозволяє на протязі години трансформувати Escherichia coli JM109 і Klebsiella oxytoca VN13 з ефективністю до 2,5·10⁵ трансформантів на 1 мкг ДНК. Друга дає можливість за 5 хв трансформувати ці штами з ефективністю 1·10⁴ трансформантів на 1 мкг ДНК. Модифікації були успішно використані для трансформації Enterobacter cloaceae ССМ1902, Е. aerogenes ССМ2531 і Erwinia carotovora subsp. carotovora 1MB 8351.

Standard and simplified modifications of freese-thaw method for enterobacteria transformation are described. First enables one to transform E. coli JM109 and K. oxytoca VN13 within 1 hour with an efficiency of about 2.5·10⁵ transformants per microgram of plasmid pUC4k DNA. Simplified modification gives an efficiency of 1·10⁴ transformants per microgram of pUC4k DNA within 5 min. Both modifications were successfully applied for the transformation of Enterobacter cloaceae JMV8351.