Клонування та надекспресія фрагмента гена структурного білка El штама Ші-Минь вірусу класичної чуми свиней в Escherichia coli

Abstract

З використанням зворотньо-транскриптазної полімеразної ланцюгової реакції клоновано та секвеновано фрагмент гена білка Е1 вірулентного штама Ші-Минь вірусу класичної чуми свиней довжиною 775 пар нуклеотидів. Отримано експресію цього фрагмента в Е. coli у вигляді злитого з глутатіон-й-трансферазою білка. Молекулярна маса частини білка E1 збігалася з розрахованою теоретично та становила близько 31 к Да. Рекомбінантний білок знаходився головним чином у нерозчинній фракції, його кількість становила до 15% від загального білка клітини. Обговорюються можливості застосування отриманого рекомбінантного білка.

С использованием обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции клонирован и секвенирован фрагмент гена белка Е1 вирулентного штамма Ши-Мынь вируса классической чумы свиней длиной775 пар нуклеотидов. Получена экспрессия этого фрагмента в Е. coli в виде слитого сглутатион-З-трансферазой белка. Молекулярная масса части белка Е1 совпала с рассчитанной теоретически и составила около 31 к Да. Рекомбинантный белок находится, главным образом, в нерастворимой фракции, его количество составляет до 15% общего белка клетки. Обсуждаются возможности применения полученного рекомбинантного белка.

A fragment of El gene of virulent strain Shi-Min of classical swine fever virus(CSFV) 775 bp in length has been cloned using reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Primary sequence of the cloned fragment has been determined. This fragment has been fused to glutathione-S-transferase and expressed in E. coli. Molecular weight of the part of El protein was estimated to be 31 kD as expected. The recombinant protein has been found mainly in insoluble fraction, its yield was up to 15% of the total cellular protein. Possible use of the protein is discussed.