Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК

Abstract

В работе показано, что СоlE1-родственные сверхскрученные плазмиды, полученные хлорамфениколзависимой амплификацией, можно использовать как для выявления нежелательных примесных эндонуклеаз во (многих продажных и лабораторных препаратах протеаз, ферментов нуклеинового обмена, химических реагентов, так и для сравнительной оценки активности некоторых ДНКаз и РНКаз.

Показано, що СоlE1-споріднені надскручені плазміди, отримані хлорамфеніколзалежною ампліфікацією, можна використовувати як для виявлення небажаних домішкових ендонуклеаз у багатьох продажних і лабораторних препаратах протеаз, ферментів нуклеїнового обміну, хімічних реагентів, так і для порівняльної оцінки активності деяких ДНКаз і РНКаз.

Supercoiled DNA is known to be a sensitive substrate for detecting the endonucleolytic activity. Supercoiled pBR322 and other ColE1-related plasmids are shown to be highly useful both for detecting nonspecific endonucleolytic admixtures in many biochemical preparations and for comparative estimation of certain DNAses and RNAses activity. More than 30 enzymes, proteins and chemical substances (salts, sucrose, eys.) commonly used for nuclear acids and nucleoproteins structural study are analyzed. Certain commercial praparation of proteolytic enzymes, kinases, ligases, polymerases, etc. are found to contain a detectable level of the endonucleolytic activity.