Создание модели – трансгенных кроликов,содержащих в геноме антисмысловые конструкции гена аполипопротеина al человека для генетической коррекции атерогенных нарушений липидного обмена

Abstract

Сконструированные рекомбинантные ДНК, содержащие способный к экспрессии антисмысловой ген aпoAl человека, были инъецированы в зиготы кроликов для получения раннегенных животных. Методами дот-блот-гибридизации ДНК и биохимического анализа липидов и липопротеидов сывороток крови родившихся кроликов выявлены животные, содержащие разное число копий интегрированной в хромосомы экзогенной ДНК и с разной степенью нарушения липидного обмена. В одном случае экспрессия антисмыслового гена привела к подавлению синтеза липопротеидов высокой плотности, в двух – к снижению содержания а-липопротвидного холестерина (XC) по отношению к общему. Во всех трех случаях наблюдались и другие изменении показателей липионого обмена (повышение общего XC, триглицеридов), характерные для атеросклероза. Полученные трансгенные кролики могут, таким образом, служить моделью для разработки подходов к генетической коррекции этой патологии.

Сконструйовані рекомбінантні ДНК, що містять здатний до експресії антисенсовий ген aпoAl людини, ін’єковано в зиготи кролів для отримання ранньогенних тварин. Методами дот-блот-гібридизації ДНК та біохімічного аналізу ліпідів і ліпопротеїдів сироваток крові народжених кроликів виявлено тварини, що містять різну кількість копій інтегрованої в хромосоми екзогенної ДНК і з різним ступенем порушення ліпідного обміну. В одному випадку експресія антисенсового гена призвела до пригнічення синтезу ліпопротеїдів високої щільності, у двох – до зниження вмісту α-ліпопротеїдного холестерину (XC) відносно загального. У всіх трьох випадках спостерігали і інші зміні показників ліпідного обміну (підвищення загального XC, тригліцеридів), характерні для атеросклерозу. Отримані трансгенні кролики можуть, таким чином, слугувати моделлю для розробки підходів до генетичної корекції цієї патології.

The recombinant DNA molecules containing potentially expressing human apoA-I antisence gene were constructed and injected into the rabbit zygotes. Dot-blot hybridization techniques as well as lipid and lipoprotein analyses methods were used to reveal transgenic animals. It was found that DNAs of several rabbits contained up to 40 copies of molecules of foreign DNA per genome. It was interesting that the patterns of serum lipid and lipoprotein metabolism of transgenic animals were shifted to atherogenic phenotype. In one case the expression of the antisense gene was able to suppress the synthesis of high-density lipoproteins. In two other cases the expression of this gene as appeared was correlated with a decrease of α-lipoprotein cholesterol level. In all the cases serum cholesterol and (or) triglyceride levels increased as well. Thus, the obtained transgenic rabbits may serve as a model to study and genetically correct atherogenic disturbances of lipid metabolism.