Виявлення генів, які детермінують якісні характеристики зерна та стійкість до стресових факторів у кукурудзи

Abstract

Здійснено оцінку 200 експериментальних форм кукурудзи НВФГ «Компанія "Маїс"» щодо наявності генів, які детермінують якісні характеристики зерна (гени wx та fl-2) та стійкість до гербіцидів (гени bar (pat), epsps) і комах (cryгени). Проведено виділення загальної ДНК з живої рослинної тканини кукурудзи, добір та дизайн праймерів для виявлення генів wx, fl-2, bar (pat), mepsps, CP4 epsps, cry1A(b), cry1F, cry1A.105, mcry3A, cry2Ab2, cry3Bb1, cry34Ab1, cry35Ab1. Розроблено методики мультиплексної та низхідної (Touchdown) полімеразних ланцюгових реакцій (ПЛР) та проведено ампліфікацію визначених послідовностей. Серед проаналізованих 200 експериментальних форм кукурудзи НВФГ «Компанія «Маїс» жодного трансгена (bar (pat), mepsps, CP4 epsps, cry1A(b), cry1F, cry1A.105, mcry3A, cry2Ab2, cry3Bb1, cry34Ab1, cry35Ab1) виявлено не було, у той час як ген fl-2 знайдено у 41-му зразку, ген wx — у 192-х проаналізованих зразках.

Осуществлена оценка 200 экспериментальных форм кукурузы НПФХ «Компания "Маис"» относительно наличия генов, детерминирующих качественные характеристики зерна (гены wx и fl-2), устойчивость к гербицидам (гены bar (pat), epsps) и насекомым (cry-гены). Проведено выделение общей ДНК из живой растительной ткани кукурузы, подбор и дизайн праймеров для обнаружения генов wx, fl-2, bar (pat), mepsps, CP4 epsps, cry1A(b), cry1F, cry1A.105, mcry3A, cry2Ab2, cry3Bb1, cry34Ab1, cry35Ab1. Разработаны методики мультиплексной и нисходящей (Touchdown) полимеразной цепной реакции (ПЦР) и проведена амплификация определенных последовательностей. Среди проанализированных 200 экспериментальных форм кукурузы НПФХ «Компания "Маис"» ни одного трансгена (bar (pat), mepsps, CP4 epsps, cry1A(b), cry1F, cry1A.105, mcry3A, cry2Ab2, cry3Bb1, cry34Ab1, cry35Ab1) обнаружено не было, в то время как ген fl-2 найден в 41-м образце, ген wx выявлен в 192-х проанализированных образцах.

200 experimental maize samples (Maize Company) were examined for the presence of genes that determine the quality characteristics of grain (wx and fl-2 genes), herbicide (bar (pat), epsps genes) and insect (cry-genes) resistance. The total DNA was extracted from maize living plant tissue. Primers to detect wx, fl-2, bar (pat), mepsps, CP4 epsps, cry1A(b), cry1F, cry1A.105, mcry3A, cry2Ab2, cry3Bb1, cry34Ab1, cry35Ab1 genes were designed and selected. Multiplex and Touchdown PCR were worked out. PCR amplification of certain sequences was carried out. No transgenes (bar (pat), mepsps, CP4 epsps, cry1A(b), cry1F, cry1A.105, mcry3A, cry2Ab2, cry3Bb1, cry34Ab1, cry35Ab1) were found among 200 analyzed experimental maize samples. At the same time, fl-2 gene was found in 41 samples, wx gene was found in 192 analyzed samples.