Каталітичні властивості гідропероксидліази з проростків картоплі

Abstract

Вивченi каталiтичнi властивостi гiдропероксидлiази (ГПЛ) з проросткiв картоплi. ГПЛ екстрагували з проросткiв картоплi та очищали центрифугуванням, солюбiлiзацiєю за наявностi детергенту, осадженням сульфатом амонiю, iонообмiнною хроматографiєю. Значення pH 6,3 i 6,5 були оптимальними для гiдролiзу субстратiв — 9-гiдропероксиду лiнолевої кислоти i 13-гiдропероксиду лiнолевої кислоти вiдповiдно. Субстратна специфiчнiсть очищеної на DEAE-Toyopearl ГПЛ була визначена шляхом вивчення активностi ГПЛ з 9-гiдропероксидом лiнолевої кислоти, 9-гiдропероксидом лiнолевого спирту i 13-гiдропероксидом лiнолевої кислоти. Уявнi значення KМ для 9-гiдропероксиду лiнолевої кислоти i 13-гiдропероксиду лiнолевої кислоти становили 3,92 i 6,31 мкМ, вiдповiднi значення Vmax — 5,54 i 1,94 мкM/хв. 9-гiдропероксид лiнолевого спирту iнгiбував ГПЛ з IC₅₀ 20 мкМ. Фосфатидна кислота пригнiчувала ГПЛ на 40% при 50 мкМ, що вказує на роль цього фосфолiпiду в пiдтриманнi внутрiшньоклiтинного рiвня гiдропероксидiв лiпiдiв.

Изучены каталитические свойства гидропероксидлиазы (ГПЛ) из проростков картофеля. ГПЛ экстрагировали из проростков картофеля и очищали центрифугированием, солюбилизацией в присутствии детергента, осаждением сульфатом аммония, ионообменной хроматографией. Значения pH 6,3 и pH 6,5 были оптимальными для гидролиза субстратов — 9-гидропероксида линолевой кислоты и 13-гидропероксида линолевой кислоты соответственно. Субстратная специфичность очищенной на DEAE-Toyopearl ГПЛ была определена путем изучения активности ГПЛ по отношению к 9-гидропероксиду линолевой кислоты, 9-гидропероксиду линолевого спирта и 13-гидропероксиду линолевой кислоты. Кажущиеся значения KМ для 9-гидропероксида линолевой кислоты и 13-гидропероксида линолевой кислоты составили 3,92 и 6,31 мкМ, соответствующие значения Vmax — 5,54 и 1,94 мкM/мин. 9-гидропероксид линолевого спирта ингибировал ГПЛ с IC₅₀ 20 мкМ. Фосфатидная кислота ингибировала ГПЛ на 40% при 50 мкМ, что свидетельствует о роли этого фосфолипида в поддержании внутриклеточного уровня гидропероксидов липидов.

Catalytic properties of hydroperoxide lyase (HPL) from potato seedlings are studied. HPL was extracted from potato seedlings and purified by centrifugation, solubilization with detergent, ammonium sulfate precipitation, and ion-exchange chromatography. pH 6.3 and 6.5 were optimum for the lysis of 9-hydroperoxy-linoleic acid and 13-hydroperoxy-linoleic acid substrates, respectively. The substrate specificity of the DEAE-Toyopearl-purified HPL was determined by examining the activities of the HPL with 9-hydroperoxy-linoleic acid, 9-hydroperoxy-linoleic alcohol and 13-hydroperoxy- linoleic acid. Apparent KМ values for 9-hydroperoxy-linoleic acid and 13-hydroperoxy-linoleic acid were 3.92 and 6.31 μM. Corresponding Vmax values were 5.54 and 1.94 μM/min. 9-hydroperoxy- linoleic alcohol inhibits HPL with an IC₅₀ of 20 μM. Phosphatidic acid inhibits HPL by about 40% at 50 μM, indicating a role of this phospholipid in the maintenance of cellular levels of lipid hydroperoxides.