Концентрація пептидів у екстрактах кріоконсервованих фрагментів органів свиней та поросят і роль ендогенних протеаз в їх утворенні

Abstract

Одним із підходів до проблеми корекції порушень функцій організму є створення лікарських засобів на основі біологічно активних пептидів. Нами розроблено метод одержання таких пептидів, який включає в себе процес кріоконсервування фрагментів органів. Досліджено концентрацію пептидів у екстрактах, одержаних із некріоконсервованих та кріоконсервованих фрагментів органів свиней та поросят, залежно від використаного кріопротектора та часу інкубації, а також визначена роль ендогенних протеаз в утворенні пептидів при інкубації фрагментів органів. Встановлено, що після 60-хвилинної інкубації фрагментів серця свиней та поросят, кріоконсервованих із поліетиленоксидом з м.м. 1500 (ПЕО-1500), концентрація пептидів у супернатанті значущо більша, ніж у супернатанті при інкубації контрольних та кріоконсервованих із гліцерином або ПЕО-400. Вихід пептидів у супернатант із фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят, кріоконсервованих із ПЕО-400 чи ПЕО-1500, більший, ніж із некріоконсервованих або кріоконсервованих під захистом гліцерину. Після інкубації як контрольних, так і кріоконсервованих (кріопротектор ПЕО-1500) у присутності інгібіторів протеаз фрагментів органів, концентрація пептидів у супернатанті значущо менша, ніж без їх додавання. Встановлено, що при додаванні інгібіторів протеаз зменшується кількість низькомолекулярних пептидів в екстрактах.

Одним из подходов к проблеме коррекции нарушений функций организма является создание лекарственных средств на основе биологически активных пептидов. Нами разработан метод получения таких пептидов, который включает в себя процесс криоконсервирования фрагментов органов. Исследована концентрация пептидов в экстрактах, полученных из некриоконсервированных и криоконсервированных фрагментов органов свиней и поросят, в зависимости от использованного криопротектора и времени инкубации, а также определена роль эндогенных протеаз в образовании пептидов при инкубации фрагментов органов. Установлено, что после 60-минутной инкубации фрагментов сердца свиней и поросят, криоконсервированных с полиэтиленоксидом с м.м. 1500 (ПЭО-1500), концентрация пептидов в супернатанте значимо больше, чем в супернатанте после инкубации контрольных и криоконсервированных с глицерином или ПЭО-400. Выход пептидов в супернатант из фрагментов селезенки свиней и кожи поросят, криоконсервированных с ПЭО-400 или ПЭО-1500, больше, чем из некриоконсервированных или криоконсервированных под защитой глицерина. После инкубации как контрольных, так и криоконсервированных (криопротектор ПЭО-1500) в присутствии ингибиторов протеаз фрагментов органов, концентрация пептидов в супернатанте значимо меньше, чем без их добавления. Установлено, что при добавлении ингибиторов протеаз уменьшается количество низкомолекулярных пептидов в экстрактах.

Production of medicines based on bioactive peptides is one of the approaches of correcting body dysfunctions. We have developed the method to procure these peptides, which includes cryopreservation of organ fragments. The concentration of peptides in the extracts obtained from non-cryopreserved and cryopreserved fragments of pig and piglet organs was investigated, depending on the used cryoprotectant and incubation period. The role of endogenous proteases in formation of peptides during incubation of organ fragments was discovered. It was found that after 60-min incubation of heart fragments of pigs and piglets, cryopreserved with polyethylene oxide with MW of 1500 (PEO-1500), the peptide concentration in supernatant was significantly higher than after incubation of those of control and cryopreserved with either glycerol or PEO-400. Yield of peptides into supernatant from fragments of pig spleen and piglet skin, cryopreserved with PEO-400 or PEO-1500 was higher than that from non-cryopreserved or cryopreserved under protection of glycerol ones. Following incubation of both control and cryopreserved (cryoprotectant PEO-1500) fragments of organs with protease inhibitors, the peptide concentration in the supernatant was significantly lower than without their addition. It has been found that after introduction of protease inhibitors the amount of low molecular peptides in extracts decreased.