Морфофункціональні характеристики свіжовиділених і кріоконсервованих клітин гранульози та кумулюса яєчників людини

Abstract

Використання комплексу клітин гранульози та кумулюса (КГК) може бути перспективним при співкультивуванні гамет та ембріонів у програмах допоміжних репродуктивних технологій (ДРТ), що робить нагальним їх кріоконсервування. В роботі вивчали КГК жінок віком 25–39 років, які проходили курс лікування безпліддя методом IVF. Для кріоконсервування суспензії КГК використовували 1,5 М розчин 1,2-ПД. Зразки охолоджували зі швидкістю 0,3 град/хв від 25 до –6°С, далі здійснювали ініціацію кристалоутворення, від –6 до –35°С швидкість охолодження складала 1 град/хв; після цього зразки занурювали в рідкий азот і зберігали при –196°С. Після відігрівання КГК зберігали свої основні властивості: здатність до адгезії та проліферації, а також гормонопродукуючу функцію. При культивуванні виявлено затримку розвитку культури КГК на 1–2 доби в порівнянні зі свіжовиділеними клітинами. Через 7 діб після експлантації культури деконсервованих КГК практично не відрізнялись від первинних культур КГК відповідного терміну розвитку in vitrо. Змінився рівень гормонопродукції КГК після кріоконсервування: естрадіолу – знизився на 89,9%, а прогестерону – підвищився на 81,4% відносно показників свіжовиділених суспензій. Отримані результати свідчать про те, що КГК можна отримувати і зберігати в умовах низькотемпературних банків з метою подальшого використання у ДРТ.

Использование комплекса клеток гранулезы и кумулюса (КГК) может быть перспективным при сокультивировании гамет и эмбрионов в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), что делает актуальным их криоконсервирование. В работе изучали КГК женщин возрастом 25–39 лет, проходивших курс лечения бесплодия методом IVF. Для криоконсервирования суспензии КГК использовали раствор 1,5 М 1,2-пропандиола. Образцы охлаждали со скоростью 0,3 град/мин от 25 до –6°С, далее осуществляли инициацию кристаллообразования, от –6 до –35°С скорость охлаждения составляла 1 град/мин, после этого образцы погружали в жидкий азот и хранили при –196°С. После отогрева КГК сохраняли свои основные свойства: способность к адгезии и пролиферации, а также гормонопродуцирующую функцию. При культивировании выявлена задержка развития культуры КГК на 1–2 суток по сравнению со свежевыделенными клетками. Через 7 суток после эксплантации культуры деконсервированных КГК практически не отличались от первичных культур соответствующего срока развития in vitro. Изменился уровень гормонопродукции КГК после криоконсервирования: эстрадиола – снизился на 89,9%, а прогестерона – повысился на 81,4% относительно показателей свежевыделенных суспензий. Полученные результаты свидетельствуют о том, что КГК можно получать и хранить в условиях низкотемпературных банков с целью дальнейшего использования в ВРТ.

Utilization of granulosa and cumulus cell (GCC) complex could be prospective for co-culture of gametes and embryos as a part of assisted reproductive technologies (ART), that makes important their cryopreservation. The study was performed in GCCs of women aged 25–39, who underwent the treatment of infertility by IVF. Cryopreservation of GCC suspension was carried out using 1.5 M 1,2-propane diol solution. The samples were cooled with rate of 0.3 deg/min from 25 down to –6°C, thereafter the ice crystal initiation was done, from –6 down to –35°C the cooling rate was 1 deg/min, after that the samples were plunged into liquid nitrogen and stored then at –196°C. Following thawing the GCCs retained their main features: ability for adhesion and proliferation, and hormone production. During culture of GCCs its development was delayed for 1–2 days if compared with freshly isolated cells. In 7 days after explanting the cultures of frozen-thawed GCCs appeared nearly the same as primary cultures of corresponding terms of in vitro culture. The post thaw level of hormone production by GCCs was changed: decreased by 89.9% in case of estradiol, and increased by 81.4% for progesterone if compared with the indices of freshly isolated suspensions. The obtained results testify to a possibility to isolate the GCCs and then to store in low-temperature banks for prospective use in ART.