Конструирование химерного интеин-содержащего белка и оценка условий его расщепления

Abstract

Белковым сплайсингом называют пост-трансляционное автокаталитическое вырезание внутренней белковой последовательности (интеина) с последующим лигированием фланкирующих пептидов (экстеинов). Высокая специфичность расщепления белков-предшественников, которая обеспечивается интеинами, позволяет использовать белковый сплайсинг в биотехнологических целях. Цель работы – получение в клетках E. coli рекомбинантного фактора роста человека с нативным N-концом. Для этого был создан химерный белок, состоявший из короткого N-концевого пептида, интеина Mxe GyrA и гормона роста человека. В процессе трансляции формилметионином модифицируется N-концевой пептид, впоследствии удаляющийся. Показано, что интеин обеспечивал отщепление экстеинов, однако последующего их лигирования не происходило. Это позволило получить гормон роста человека с нативным N-концом. Исследовано влияние различных факторов на эффективность расщепления. Установлено, что наилучший результат расщепления химерного белка (60–80 %) достигается при добавлении индуктора (100 мМ β-меркаптоэтанол) с инкубацией в течение 4–6 сут.