Одержання і властивості α-амілази з Bacillus sp. BKL40

Abstract

Виділено штам Вacillus sp. BKL40, здатний секретувати в середовище культивування α-амілазу, стабільну за високих температур і лужних значень рН. Оптимізацією умов культивування штаму-продуцента досягнено найбільшої продукції ензиму. Інтенсивність синтезу α-амілази не залежала від наявності крохмалю в середовищі культивування й стимулювалася додаванням пептону (0,3%) та дріжджового екстракту (0,2%). Ензим повністю зберігав амілолітичну активність після 30 хв інкубації при 60 і 70 0С. α-Амілаза виявляла високу активність у широкому діапазоні значень рН — від 6,0 до 11,0 і зберігала активність навіть після 24 год інкубації за цих значень рН. Досліджувана α-амілаза не активувалась іонами кальцію та іонами інших двовалентних металів (1 мМ), а також не інгібувалась EДTA та EГTA (1–10 мМ), що може свідчити про відсутність іонів кальцію у структурі її молекули.

Изолирован штамм Вacillus sp. BKL40, способный секретировать в среду культивирования α-амилазу, стабильную в условиях высоких температур и щелочных значений рН. Оптимизацией условий культивирования штамма-продуцента достигнута наивысшая продукция энзима. Синтез α-амилазы не зависел от наличия крахмала в среде культивирования и стимулировался добавлением пептона (0,3%) и дрожжевого экстракта (0,2%). Энзим полностью сохранял амилолитическую активность после 30 мин инкубации при 60 и 70 ºС. α-Амилаза проявляла высокую активность в широком диапазоне значений рН — от 6,0 до 11,0 и сохраняла активность даже после 24 ч инкубации при щелочных значениях рН. Изучаемая α-амилаза не активировалась ионами кальция и других двухвалентных металлов (1 мМ), а также не ингибировалась ЭДTA и ЭГTA (1 и10 мМ), что может свидетельствовать об отсутствии ионов кальция в структуре ее молекулы.

Strain BKL40 was identified as a producer of thermostable alkaline α-amylase. Maximum production of this α-amylase was achieved by optimizing culture conditions. Production of α-amylase seemed to be independent on the presence of starch in the culture medium and was stimulated by peptone (0.3%, w/v) and yeast extract (0.2%, w/v). The enzyme was thermostable and retained amylolytic activity after 30 min of incubation at 60 and 70 ºC. High activity was maintained over a broad pH range from 6.0 to 11.0 and the enzyme remained active after alkaline incubation for 24 h. Bacillus sp. BKL40 α-amylase was not stimulated by calcium and other bivalent metal cations at 1mM and was not inhibited by EGTA or EDTA at 1-10 mM, suggesting that this α-amylase does not contain calcium ions in its active site.