Оптимізація умов Agrobacterium-опосередкованої трансформації калюсів м'якої пшениці

Abstract

Досліджено вплив різних концентрацій клітин агробактерій та антибіотика цефотаксиму, тривалості співкультивування і типу селекції на частоту Agrobacterium-опосередкованої трансформації морфогенних калюсів м’якої пшениці сорту Зимоярка. Показано, що найоптимальнішою для генетичної трансформації є концентрація агробактерій 0,2 оптичних одиниці, тривалість співкультивування калюсів з агробактеріями протягом 3 діб, використання антибіотика цефотаксиму концентрацією 250 мг/л та ступінчаста селекція. За таких умов 54 % калюсів зберігали морфогенний потенціал. Серед індукованих із калюсів регенерантів методом полімеразної ланцюгової реакції виявлено 6 рослин пшениці з трансгенами pdh тa nptII у геномі.

Исследовано влияние различных концентраций клеток агробактерий и антибиотика цефотаксима, продолжительности сокультивирования и типа селекции на частоту Agrobacterium-опосредованной трансформации морфогенных каллюсов мягкой пшеницы сорта Зимоярка. Показано, что наиболее оптимальной для генетической трансформации является концентрация агробактерий 0,2 оптические единицы, продолжительность сокультивирования каллюса с агробактериями в течение 3 суток, использование антибиотика цефотаксима в концентрации 250 мг/л и ступенчатая селекция. При таких условиях 54 % каллюсов сохраняли морфогенный потенциал. Среди индуцированных из каллюсов регенерантов методом полимеразной цепной реакции обнаружены 6 растений пшеницы с трансгенами pdh и nptII в геноме.

The effect of various concentrations of Agrobacterium and the antibiotic cefotaxime, coculture duration and type of selection on the frequency of Agrobacterium-mediated transformation of bread wheat morphogenic calluses variety Zimoyarka has been investigated. It is shown that the most optimal for genetic transformation is the concentration of bacteria 0,2 OD, callus and bacteria coculture for 3 days, the use of the antibiotic cefotaxime at 250 mg/l and step by step selection. Under these conditions, 54 % calli were retained morphogenic potential. Six wheat plants were detected by PCR which have transgenes pdh and nptII.