Optimization of tumor cell culture conditions in soft agar for subsequent immunohistochemical analysis

Abstract

Мета. Оптимізувати умови культивування злоякісних клітин у напіврідкому агарі для подальшого імуногістохімічного аналізу отриманих тривимірних колоній клітин. Методи. Культивування клітин лінії MCF-7 карциноми молочної залози у напіврідкому агарі, імуногістохімічне та імунофлуоресцентне виявлення епітеліальних антигенів і кінази mTOR у культивованих клітинах. Результати. Описано методичний підхід до культивування клітин у напіврідкому агарі, що дозволяє проводити морфологічний, морфометричний та імунохімічний аналіз досліджуваних клітин. Висновки. Запропонований метод надає додаткову характеристику клітин, які ростуть у напіврідкому агарі, що може бути корисним як для базових досліджень, так і при оцінці ефективності протипухлинних препаратів. Ключові слова: напіврідкий агар, оцінка ефективності колонієутворення, тривимірні культури злоякісних клітин.

Цель. Оптимизировать условия культивирования злокачественных клеток в мягком агаре для последующего иммуногистохимического анализа образованных трехмерных колоний клеток. Методы. Культивирование клеток линии MCF-7 карциномы молочной железы в мягком агаре, иммуногистохимическое и иммунофлюоресцентное выявление эпителиальных антигенов и киназы mTOR в культивированных клетках. Результаты. Описан методический подход к культивированию клеток в мягком агаре, позволяющий проводить морфологический, морфометрический и иммунохимический анализ исследуемых клеток. Выводы. Предложенный метод предоставляет дополнительную характеристику клеток, растущих в мягком агаре, что может быть полезным как для базовых исследований, так при оценке эффективности противоопухолевых препаратов. Kлючевые слова: мягкий агар, оценка эффективности колониеобразования, трехмерные культуры злокачественных клеток.

Aim. The aim of this work is to optimize conditions of malignant cells cultivation in soft agar for subsequent immunohistochemical analysis of formed three-dimensional colonies. Methods. Cultivation of breast carcinoma cell line MCF-7 in soft agar, immunohistochemical and im- munofluorescence detection of epithelial antigen and mTOR kinase in cultured cells. Results. We describe a methodical approach to the cultivation of cells in soft agar, which allows to carry out morphological, morphometric and immunochemical analysis of the studied cells. Conclusions. The proposed method provides an additional characteriza tion of cells growing in soft agar, which will be useful in basic research and in evaluation of the effectiveness of anticancer drugs. Keywords: soft agar, evaluation of colony formation, three-dimensional culture of malignant cells.