Получение и характеристика моноклональных антител против эукариотического трансляционного фактора элонгации 1А

Abstract

Эукариотический фактор элонгации трансляции 1 А (eEF1A) является одним из основных компонентов трансляционного аппарата клетки, а также выполняет целый ряд неканонических функций, не связанных с процессом трансляции. В данной работе фактор элонгации 1А из печени курицы очищен практически до гомогенности с помощью последовательных хроматографии на различных носителях. Очищеный белок использован для получения моноклональных антител против eEF1A, являющихся видонеспецифичными и распознающих этот белок в иммуноферментном анализе и иммуноблотинге, а также при иммуногистологических исследованиях человече­ского материала. Моноклональные антитела взаимодействовали как с первой, так и со второй изоформой eEF1A. Полученные антитела будут использованы для изучения канонических и неканонических функций eEF1A, в частности, для выяснения предполагаемой роли этого белка в онкогенезе.

Еукаріотичний фактор елонгації трансляції 1A (eEF1A) – один з основних компонентів трансляційного апарату клі­тини, виконує цілу низку неканонічних функцій, не пов'язаних з процесом трансляції. У представленій роботі фактор елон­гації 1А з печінки курки очищено практично до гомогенності за допомогою послідовних хроматографій на різних носіях. Очищений білок використано для отримання моноклональних антитіл проти eEF1A, які є видонеспецифічними і розпі­знають цей білок в імуноферментному аналізі та імуноблотингу, а також при імуногістологічних дослідженнях тканин людини. Моноклональні антитіла взаємодіяли як з першою, так і з другою ізоформою eEF1A. Отримані антитіла буде використано для вивчення канонічних і неканонічних функцій eEF1A, зокрема, для з'ясування можливої ролі цього білка в онкогенезі.

Eukaryotic translation elongation factor 1A (eEF1A) is one of the main components of the translation apparatus.The protein also fulfills a number of non-canonical functions not related directly to protein synthesis. In this work the homogenous elongation factor 1A was obtained from hen liver by several chromatographic procedures with different carriers. The purified protein was used to develop monoclonal antibodies. The anti-eEF1A antibodies obtained are species-unspecific, they recognize both eEF1A and eEF1A2 isoforms in ELJSA and immunoblotting. The antibodies have been successfully used for immunohistological studies on human tissues.