Из сыворотки крови больных системной красной волчанкой последовательными хроматографиями на колонках с протеин-А-сефарозой и DEAE-сорбентом получен электрофоретически гомогенный препарат IgG (препарат 1). Из этого препарата хроматографией на колонке с АТР-сефарозой выделена фракция IgG (препарат 2), обладающая сродством к ATР. При инкубации препаратов 1 и 2 с [γ-32Р]АТР наблюдалось образование низкомолекулярных 32Р-меченных продуктов. В составе этих продуктов обнаружены фосфолипиды, образующие шесть фракций при разделении двухмерной тонкослойной хроматографией. В присутствии липидов фосфорилирования IgG в исследуемых препаратах не отмечено. После удаления липидов гель-фильтрацией в буфере, содержащем 5 % диоксана, происходит фосфорилирование H- и L-цепей IgG. Добавление в реакционную среду, содержащую 0,018 мкМ [γ- 32Р]АТР, 1 мкМ «холодного» АТР увеличивало включение 32Р в Н-цепи IgG.
З сироватки крові хворих на системний червоний вовчак послідовними хроматографіями на колонках з протеїн-А-сефарозою та DEAE-сорбентом отримано електрофоретично гомогенний препарат IgG (препарат 1). З цього препарату хроматографією на колонці з АТР-сефарозою виділено фракцію IgG (препарат 2), яка мала спорідненість до АТР. При інкубуванні препаратів 1 і 2 з [γ- 32Р]АТР спостерігалося утворення низькомолекулярних 32Р-мічених продуктів. У складі останніх виявлено фосфоліпіди, які утворювали шість фракцій при розділенні двовимірною тонкоиіаровою хроматографією. За присутності ліпідів фосфорилювання IgG у досліджуваних препаратах не виявлено. Після видалення ліпідів гель-фільтрацією в буфері, який містив 5 % діоксану, відмічено фосфорилювання Н- та L-ланцюгів IgG. Додавання до реакційної суміиіі, що містила 0,018 мкМ [γ- 32P]ATP, 1 мкМ «холодного» АТР збільшувало включення 32Р у H-ланцюги IgG.
This article evidences that phosphotransferase activity is associated with IgG fraction from blood serum of humans with lupus erythromatosis pathology. Polyclonal IgG (f. 1) was purified by sequential chromatography on protein-A-sepharose and DEAE-Fractogel. The IgG fraction (f. 2) possessing affinity to ATP was obtained by chromatography of f. 1 on ATP-sepharose. Phosphorylation of f. 1 and f. 2 in the presence of [γ-32P]ATP caused the formation of 32P-labeled low-molecular-weight non-protein products detected by SDS-electrophoresis. These products contained 32P-labeled phospholipids which formed 6 fractions upon separation by the two-dimensional TLC. The IgG polypeptides phosphorylation was not observed. After removal of the lipids by gel-filtration in the buffer containing 5 % dioxan, the phosphorylation of H- and L-chains of IgG has been detected. Addition of 1 μM ATP to the reaction medium containing 0,018 μM [γ-32P] ATP, increased inclusion of 32P in the H-chain of IgG. We assume, that IgG-abzymes having phosphotranspherase activity may be present in blood of humans with lupus erythromatosis patology.
