Трансформация растений Nicotiana tabacum геном ДНК-топоизомеразы II типа Drosophila melanogaster

Abstract

На основе бинарного вектора pBinl9 создана плазмида pBinl9/t2103, содержащая структурный ген ДНК-топоизомеразы II типа D. melanogaster под контролем 35S-промотора вируса мозаики цветной капусты. Конструкция перенесена в растения табака N. tabacum SR-I с помощью опосредованной агробактериями трансформации по методу листовых дисков. Селектирован ряд устойчивых к канамицину линий. С помощью методов Саузерн- и Нозерн-блотинг-гибридизаций показана интеграция гена в состав геномной ДНК и его экспрессия на уровне транскрипции. В геноме табака обнаружена последовательность, гибридизующаяся с фрагментом гена ДНК-топоизомеразы II дрозофилы. Эта последовательность, возможно, является геном растительной ДНК-топоизомеразы II типа.

На основі вектора pBin19 сконструйовано плазміду pBin19/t2103 , яка несе структурний ген ДНК - топоізомерази II типу D. melanogaster під контролем 35S - промотора вірусу мозаїки цвітної капусти. Конструкцію перенесено в рослини тютюну N. tabacum SR -1 за допомогою опосередкованої агробактерій трансформації за методом листяних дисків. Селектовано ряд стійких до канаміцину ліній, за допомогою методів Саузерн - і Нозерн - блотинг - гібридизації показано інтеграцію гена до складу геномної ДНК та експресію введеного гену на рівні транскрипції. У геномі тютюну виявлена ??послідовність , яка гібридізується з фрагментом гена ДНК - топоізомерази II дрозофіли. Ця послідовність , можливо, ця послідовність є геном рослинної ДНК - топоізомерази II типу.

A plasmid pBin19/t2103 based on a binary vector pBin19 has been constructed. The plasmid carryes the structural gene coding for DNA topoisomerase II type from D. melanogaster under control of 35S promoter from cauliflower mosaic virus. The construction was introduced into tobacco plants N. tabacum SR-1 using A. tumefaciens-mediated transformation. An integration of the gene in plant genome and its expression on transcriptional level have been shown. A sequence from tobacco genome was found to hybridized with the fragment of the topoisomerase II structural gene. It seems to be plant DNA topoisomerase II type gene.