Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека

Abstract

Клонированы фрагменты суммарной ДНК генома человека из лейкоцитов и клеток плаценты, способные обеспечивать автономное состояние клонирующего вектора pYF40 (в который они заключались) в Saccharomyces cerevisiae. Получены два фрагмента соответствующих молекулярных масс: 6,5 (из лейкоцитов) и 3,4 тыс. п. н. (из клеток плаценты), обладающие высокой трансформирующей способностью в пекарских дрож­жах (10²–10³ трансформантов на 10 мкг плазмидной ДНК). Выявлена продолжитель­ная экспрессия гена аро-А1 человека в составе экстрахромосомных рекомбинантных ДНК, содержащих клонированные автономно реплицирующиеся АР-последовательности в культуре клеток.

Клоновано фрагменти сумарної ДНК геному людини iз лейкоцитів i клітин плаценту здатні забезпечувати автономний стан клонуючого вектора pYF40 (у який ix вміщено) в Saccharomyces cerevisiae. Отримано два фрагменти відповідних молекуляриних мас 6,5 (iз лейкоцитів) i 3,4 тис. п. н. (iз клітин плаценти), яким притаманна висока трансформуюча здатність у пекарських дріжджах (10²–10³ трансформантів на 10 мкг плазмщної ДНК). Виявлено продовжену експреаю гена аро~А1 людини у складі екстрахромосомних рекомбінантих ДНК, що міетять клоновані АР-послідовності, які авто­номно реплікуються.

In this study we cloned two fragments of total DNA of human genome from leukocytes and placental cells, which capable provide of autonomously state of pYF40 cloning vector (in which there was consisted) in Sacch. cerevisiae. The obtained fragments have in l ength: 6,5 (from leukocyte) and 3,4 kb (from placental cells), respectively. This fragments can provide high transformation in yeast (10²–10³) transformants (10 ng plasmid DNA). We have obtained long expression of apo-Al human gene carried by extrachromosomal recombinant DNA, which contain cloned ARSs (autonomously replications sequences).