Предотвращение термоинактивации фенилаланил-тРНК синтетазы Escherichia coli с помощью плазмид ColE1-ряда

Abstract

Изучена способность РНК I, контролирующей репликацию ColE 1-репликона и имею­щей тРНК-подобную структуру, а также гомологичные молекуле TPHKPhe участки, комплементировать термочувствительную фенилаланил-тРНК синтетазу Е. coll in vivo, поскольку известно, что таким свойством обладает молекула тРНКРhе. Показано, что клетки, содержащие термолабильный фермент и трансформированные плазмидами pUC 19 и pBR322, могут расти в непермиссивных условиях (42 °С) при выращивании всех клеток, участвовавших в трансформационной процедуре, в течение ночи с аэра­цией в разбавленном мясном бульоне.

Вивчено здатність РНК I, яка контролює репліацію ColEl-реплікона та має тРНК- подібну структуру i гомологічні молекулі тРНКРhе ділянки, комплементувати термочутливу фeнiлaлaнiл-тPHK синтетазу Е. coli in vivo, оскільки відомо, що подібна властивість притаманна молекулі тРНКРhе. Показано також, що клітини, які містять термолабільний фермент i траноформовані iплaзмiдaми pUC19 i pBR322, можуть рости в непермісивних умовах (42°С) при вирощувані вcix клігин, залучених до трансформаційної процедури, протягом ночі з аєрацією в розбавленому м'ясному бульйоні.

Because RNA I controlling ColEl plasmid replication is tRNA-like structure and has consensus and homological sequences of tRNAphe we studied the ability of this molecule to complement thermolabile phenylalanyl-tRNA synthetase in vivo just like tRNAphe can do. We showed that cells containing this enzyme and transformed with pUC19 and pBR322 plasmids could grow at 42 °C when grown overnight with aeration in diluted meat broth incubating all transformants at a once which resulted from transformation procedure being diluted by a factor of 50.