Оболочки вируса Сендай и тени эритроцитов - мембранные переносчики для введения peакционноспособных производных олигонуклеотидов в клетки

Abstract

Изучение действия алкилирующих производных олигонуклеотидов затруднено вследствие их низкой проницаемости через клеточные мембраны. В работе предложено использовать для доставки олигонуклеотидных производных в клетку реконструированные оболочки вируса Сендай и тени эритроцитов. Разработаны быстрые методы заключения олигонуклеотидных производных в мембранные везикулы, позволяющие сохранить химические свойства активных группировок. Для реагентов, заключенных в переносчики, при меньших концентрациях производных в среде достигаются степени алкилирования поли(А)⁺РНК в 10–100 раз большие, чем при простом добавлении олигонуклеотидных производных в клеточную суспензию.

Вивчення дії алкілувальних похідних олігонуклеотидів ускладнено внаслідок їхньої низької проникності через клітинні мембрани. Запропоновано використовувати для доставки олігонуклеотидних похідних у клітину реконструйовані оболонки вірусу Сендай і тіні еритроцитів. Розроблено швидкі методи введення олігонуклеотидних похідних у мембранні везикули, що дозволяє зберегти хімічні властивості активних угруповань. Для реагентів, вміщених у переносники, при менших концентраціях похідних у середовищі досягаються ступені алкілування полі(А)⁺ РНК у 10–100 разів більші, ніж при простому додаванні олігонуклеотидних похідних у клітинну суспензію.

Poor penetration of oligonucleotide derivatives through mammalian cell membranes interferes with their action as inhibitors of cellular nucleic acid functions. This difficulty can be overcome using reconstituted Sendai virus envelopes and erythrocyte ghosts as membrane carriers of the oligonucleotide derivatives. Fast methods for incorporation of reactive oligonucleotide derivatives into membrane carriers have been developed. In the model experiments membrane carriers incorporating alkylating oligothymidylate derivatives are delivered into ascite carcinoma Krebs 2 cells and it is shown that they are transfered efficiently into cytosol and react with complementary poly (A)⁺ sequences of cellular RNAs. Efficiency of delivery of oligonucleotide reagents into cells 10—100 times increases when using the membrane vehicles.