Influence of EMAP II, IFN-α2b and its medicinal preparations on the MGMT protein amount in human cells in vitro

Abstract

Aim. To study the effect of EMAP II, IFN-α2b and its medicinal preparations on the amount of O6-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) protein in human cells in vitro. Methods. The human cells of 4BL and Hep-2 lines were treated with the purified recombinant proteins EMAP II, IFN-α2b and its commercial me dicinal preparations. Changes in the MGMT gene expression were studied at a protein level by Western blot analysis. Results. Treatment of Hep-2 and 4BL cells with EMAP II at the concentrations of 0.02 mg/ml and 2 mg/ml respectively led to induction of the MGMT gene expression. EMAP II at the concentrations of 0.2–20 g/ml caused decrease of the MGMT protein amount in Hep-2 cells. The regulating activity of EMAP II was also observed for MARP (anti-Methyltransferase Antibody Recognizable Protein). IFN-α2b and Laferon-PharmBiotek with the activity of 200 and 2000 IU/ml were shown to cause an increase of the MGMT protein amount in Hep-2 cells. Conclusions. The purified recombinant proteins EMAP II and IFN-α2b which are substrates for the medicinal preparations influenced on the amount of MGMT protein in the human cell cultures in a concentration-dependent manner. At the same time the effect of medicinal preparations differs from that of the purified protein IFN-α2b. Possibly it depends on the presence of stabilizing components in their compositions.

Мета. Дослідити вплив EMAP II, IFN-α2b та його медичних препаратів на кількість білка MGMT у клітинах людини in vitro. Методи. Клітини людини 4BL і Hep-2 обробляли EMAP II, IFN-α2b і його комерційними препаратами. Зміни в експресії гена MGMT на рівні білка досліджували за використання Вестерн-блот аналізу. Результати. Обробка клітин Hep-2 і 4BL цитокіном EMAP II в концентрації 0,02 і 2 мкг/мл відповідно призводить до індукції експресії гена MGMT. EMAP II в концентраціях 0,2–20 мкг/мл знижує кількість білка MGMT у клітинах Hep-2. Регулювальну активність EMAP II спостерігали також і відносно MARP (білка, який розпізнається моноклональними анти-MGMT антитілами). Показано, що IFN-α2b і Лаферон-ФармБіотек з активністю 200 і 2000 МО/мл підвищують кількість білка MGMT у клітинах Hep-2. Висновки. Очищені рекомбінантні білки EMAP II і IFN-α2b, які є субстратами для медичних препаратів, впливають на кількість білка MGMT у клітинах людини in vitro залежно від концентрації. У той же час дія медичних препаратів відрізняється від ефекту очищеного білка IFN-α2b, що, можливо, пов’язано з присутністю стабілізувальних компонентів у його складі.

Цель. Исследовать влияние EMAP II, IFN-α2b и его медицинских препаратов на количество белка MGMT в клетках человека in vitro. Методы. Клетки человека 4BL и Hep-2 обрабатывали EMAP II, IFN-α2b и его коммерческими препаратами. Изменения в экспрессии гена MGMT исследовали с использованием Вестерн-блот анализа. Результаты. Обработка клеток Hep-2 и 4BL цитокином EMAP II в концентрации 0,02 и 2 мкг/мл соответственно приводит к индукции экспрессии гена MGMT. EMAP II в концентрациях 0,2–20 мкг/мл снижает уровень экспрессии гена MGMT в клетках Hep-2. Регулирующую активность EMAP II наблюдали также и относительно MARP (белка, распознаваемого моноклональными анти-MGMT антителами). Показано, что IFN-α2b и Лаферон-ФармБиотек с активностью 200 и 2000 МЕ/мл повышают количество белка MGMT в клетках Hep-2. Выводы. Очищенные рекомбинантные белки EMAP II и IFN-α2b, являющиеся субстратами для медицинских препаратов, влияют на количество белка MGMT в клетках человека in vitro зависимым от концентрации образом. В то же время действие медицинских препаратов отличается от влияния очищенного белка IFN-α2b, что, возможно, связано с присутствием стабилизирующих компонентов в его составе.