Капиллярная эластовискозиметрия нуклеоидов эукариот

Abstract

С помощью предложенного метода капиллярной эластовискозиметрии изучали структурные особенности надмолекулярных комплексов ДНК (НК ДНК) на различных уровнях их организации в клетках эукариот. Исследована зависимость величин эластовязкости НК ДНК от времени лизиса и ионной силы. Показано, что константы скорости релаксации нуклеоидов для различных клеток эукариот существенно отличаются. Эластовискозиметрические кривые титрования этих клеток бромистым этидием имели бифазный характер аналогично кривым при седиментации. Показано, что изменение эластовискозиметрических характеристик нуклеоидов L1210 не обусловлено действием эндогенных протеаз, так как электрофоретический состав белков нуклеоидов при этом оставался постоянным. Нуклеазы в этих условиях эксперимента также оказались не активны. Метод капиллярной эластовискозиметрии оказался достаточно информативным и чувствительным в изучении свойств НК ДНК.

За допомогою запропонованого методу капілярної еластовіскозиметрії вивчали структурні особливості надмолекулярних комплексів ДНК (НК ДНК) на різних рівнях їхньої організації у клітинах еукаріотів. Досліджено залежність величин еластов’язкості НК ДНК від часу лізису і іонної сили. Показано, що константи швидкості релаксації нуклеоїдів для різних клітин еукаріотів істотно відрізняються. Еластовіскозиметричні криві титрування цих клітин бромистим етидієм мали біфазний характер аналогічно кривим при седиментації. Показано, що зміна еластовіскозиметричних характеристик нуклеоїдів L1210 зумовлена дією ендогенних протеаз, так як електрофоретичний склад білків нуклеоїдів при цьому залишався постійним. Нуклеази за цих умов експерименту також були не активними. Метод капілярної еластовіскозиметрії виявився досить інформативним і чутливим у вивченні властивостей НК ДНК.

The method of capillary viscoelastometry was used to study structural peculiarities of supramolecular complexes (SC DNA) at different levels of their organization (nucleoids and alkaline lysates) in eukaryotic cells mud loach sperm, P388, L1210, S37. The dependence of SC DNA viscoelasticity on time of lysic and ionic strength was studied. Velocity constants of nucleoid relaxation of various eukaryotic cells are shown to be significantly different. The curves of viscoelastometric titration of nucleoid of this eukaryotic cells with the ethidium bromide has a biphasic shape typical of supercoiled DNA, obtained by sedimentation. It is detected that the change in viscoelasticitic characteristics of L1210 nucleoids is not due to the action of endogenic proteases, since the electrophoretic composition of nucleoid proteins remained constant. Under these experimental conditions the nucleases were not active too. The method of capillary viscoelastometry appears to be enough informative and sensitive in studies of SC DNA properties.