Взаимодействие RecA-белка с хроматином ядер (цитологический аспект)

Abstract

Продемонстрирована возможность использования гена гесА в качестве модельного гена при изучении экспрессии экзогенной ДНК in vitro и in vivo. Визуализация RecА-белка в цитоплазме и ядрах проведена непрямым иммунофлюоресцентным методом. Бактериальный RecA-белок тестировали в культуре HeLa после ее обработки чистым RecA-белком или белком, заключенным в липосомы, а также после трансфекции культуры сконструированной плазмидой pKCR2. Отмечена визуализация RecA-белком хроматина ядер, которая зависела от прохождения клеткой фаз митотического цикла. В системе in vivo бактериальная β-галактозидаза и RecA-белок обнаруживались через 48 ч после проведения котрансформации печени мышей плазмидами pGA293A и pKCR2, заключенными в липосомы. Высокий уровень экспрессии recА-гена в гепатоцитах экспериментальных животных позволяет использовать его в модельных системах при изучении экспрессии экзогенной ДНК in vivo.

Продемонстрована можливість використання гену гесА як модельного при вивченні експресії екзогенної ДНК in vitro та in vivo. Візуалізація RecA-білку в цитоплазмі і ядрах проведена непрямим імунофлюоресцентним методом. Бактеріальний RecA-білок виявляли в культурі клітин HeLa після її обробки чистим білком RecA або ж білком, що міститься в ліпосомах, а також після трансфекції культури сконструйованою плазмідою pKCR2. Відзначена візуалізація RecA-білком хроматину ядер, яка залежить від проходження клітиною фаз мітотичного циклу. У системі in vivo бактеріальна β-галактозидаза і RecA-білок виявляли через 48 годин після проведення котрансформації печінки мишей плазмідами pGA293A та pKCR2, які були вміщені в ліпосоми. Високий рівень експресії recА- гену у гепатоцитах експериментальних тварин дозволяє використовувати його в модельних системах при вивченні експресії екзогенної ДНК in vivo.

Gene recA can be used as a model gene when studying the expression on exogenic DNA in vitro and in vivo. The indirect immunofluorescent method has been used for RecA protein visualization in cytoplasm and nuclei. The bacterial RecA protein has been tested in HeLa culture after treatment with RecA protein alone or included in lyposomes, and after transfection of culture by plasmid pKCR2. RecA protein was shown to contrast nucleus chromatin intensively and this process depended on the phase of mitotic cycle. Bacterial β-galactosidase and RecA protein have been observed in vivo 48 hours after cotransformation of mouse liver with pGA293A and pKCR2 plasmids, included in liposomes. High level of recA gene expression in hepatocytes of liver allows to use it in model systems when studying the exogenic DNA expression in vivo.