Изучение рекомбинационной активности в экстрактах клеток млекопитающих

Abstract

Описана бесклеточная система, в которой используются экстракты ядер миелобластов человека, клеток HeLa и семенников крыс для инициации рекомбинации между гомологичными плазмидами, несущими различные мутантные аллели Тс-гена. Инкубация этих плазмид с ядерными экстрактами увеличивала частоту Tсr-рекомбинантов с 2,6·10⁻⁵ до 2,7·10³. Реакция требует ионов Mg²⁺ и не зависит от присутствия ATP и dNTP. Кроме того, использовав чувствительный метод определения реакции переноса нити, мы частично очистили ATP-независимую рекомбиназную активность из ядерных экстрактов семенников крыс. Реакция требует гомологии между ДНК-субстратами и присутствия ионов Mg²⁺.

Описано безклітинну систему, у якій використовують екстракти ядер мієлобластів людини, клітин HeLa і сім’яників щурів для ініціації рекомбінації між гомологічними плазмідами, що несуть різні мутантні алелі Тс-гена. Інкубація цих плазмід з ядерними екстрактами збільшує частоту Tсr-рекомбінантів з 2,6·10⁻⁵ до 2,7·10³. Реакція вимагає іонів Mg²⁺ і не залежить від присутності ATP і dNTP. Крім того, використавши чутливий метод визначення реакції перенесення нитки, ми частково очистили ATP- незалежну рекомбіназную активність з ядерних екстрактів сім’яників щурів. Реакція вимагає гомології між ДНК-субстратами і присутності іонів Mg²⁺.

The cell-free system utilizing nuclear extracts from human mieloblasts, HeLa cells and rat testes to initiate recombination events between homologous plasmids containing different mutant alleles of the Tc gene has been described. The incubation of the plasmids with nuclear extracts increased the frequency of Tcr recombinants from 2,6·10⁻⁵ to 2,7·10³. The reaction required Mg²⁺ and was ATP- and dNTP-independent. In addition while using a sensitive homologous recombination strand-transfer assay ATP-independent strand-transfer activity from nuclear extracts of rat testis have been partially purified. It was homology-dependent and required the presence of Mg²⁺. Similarities between recombinase activity and other known eukaryotic recombinases are under discussion.