Модификация методов выделения РНК с гуанидинийтиоцианатом и вакуумный перенос на мембраны улучшают возможности анализа высокомолекулярных транскриптов из клеток животных

Abstract

Предложен модифицированный метод выделения PH К из клеток животных с использованием гуанидинийтиоцианата, позволяющий получать высокомолекулярные препараты как из ядра, так и из цитоплазмы. Разработана схема быстрого переноса РНК под действием вакуума из геля агарозы после электрофоретического разделения на сорбирующие мембраны. Гибридизацией с радиоактивными зондовыми ДНК показана эффективность сочетания указанных подходов для анализа размеров и распределения транскриптов индивидуальных генов между ядром и цитоплазмой.

Запропоновано модифікований метод виділення РНК із клітин тварин з використанням гуанідінійтіоціанату, що дозволяє одержувати високомолекулярні препарати як з ядра, так і з цитоплазми. Розроблена схема швидкого переносу PHK під дією вакууму з агарозного гелю після електрофоретичного розділення на сорбуючі мембрани. Гібридизацією з радіоактивними зондами показана ефективність поєднання вказаних підходів для аналізу розмірів та розподілу транскриптів індивідуальних генів між ядром і цитоплазмою.

A modified method of RNA isolation in the presence of guanidine thiocyanate from the animal cells is suggested. The method permits the purification of high molecular weight samples from nucleus as well as from cytoplasm. The technique is also developed for (luick RNA transfer using vacuum blotting from agarose gels to adsorbing membranes after electrophoretic separation of RNA. The efficiency of combination of the above two methods to analyze the size of individual gene transcripts and their distribution between the nucleus and cytoplasm is shown by hybridization of RNA blots with radioactive DNA probes.