Специфическое взаимодействие cro-репрессора с моделями операторных участков. Изучение методом кругового дихроизма

Abstract

Метод кругового дихроизма (КД) был использован для изучения взаимодействия cro-репрессора фага λ с синтетическим OR3 оператора размером 17 пар оснований и его фрагментом (9 пар оснований) 5 'TATCCCTT [GCGGTGATA] 3 'ATAGGGAA [CGCCACTAT] В обоих случаях добавление Cro-белка значительно изменило спектры КД в области 260-300 нм. Стехиометрии определяется титрованием КД и была идентична как для Oᵣ3 и его фрагмента: один дуплексный в cro димера. Взаимодействие cro-белка с неоператорным дуплексом DNAs показывает никаких видимых изменений на КД . Спектральные изменения в течение определенного взаимодействия существенно отличаются от тех, для B-A перехода и для скручивания ДНК от B- к C-форме. Сделан вывод о том, что изменения КД в основном вызваны индуцированным эффектом Tyr-26 при образование комплекса, а ДНК участка связывания сохраняется в B-форме.

Метод кругового дихроїзму (КД) використано для вивчення взаємодії cro-репрессора фага λ з синтетичним OR3 оператором розміром 17 пар основ і його фрагментом (9 пар основ) 5'-TATCCCTT [GCGGTGATA] 3'-ATAGGGAA [CGCCACTAT] В обох випадках додавання Cro-білка значно змінює спектри КД в області 260?300 нм. Стехіометрія визначається титруванням КД, вона була ідентична як для Oᵣ3, так і для його фрагмента: один дуплексний в cro димера. Взаємодія cro-білка з неоператорним дуплексом DNAs показує ніяких видимих змін на КД. Спектральні зміни протягом певної взаємодії істотно відрізняються від тих, для BA переходу і для скручування ДНК від B-до C-формі. Зроблено висновок про те, що зміни КД в основному викликані індукованим ефектом Tyr-26 при утворення комплексу, а ДНК ділянки зв'язування зберігається в B-формі.

The circular dichroism (CD) method was used to study the interaction of the crorepressor of the phage A. with a synthetic OR3 operator of 17 base pairs long, and with its 9 base pairs fragment 5' TATCCCTT [GCGGTGATA] 3' ATAGGGAA [CGCCACTAT] In both cases addition of cro-protein considerably changed the CD spectra in the region of 260-300 nm. The stoichiometry determined by the CD titration is identical both for Oᵣ3 and its fragment: one duplex per cro dimer. The interaction of the cro-protein with non-operator DNAs reveals no visible CD changes at all. The spectral changes during specific interaction are quite different from those for the B-A transition and for winding of the DNA within the B-family towards C-form. A conclusion is drawn that the CD changes are mainly induced by the CD effect in Tyr-26 during specific complex formation, the operator DNA conformation being conserved in a B-like form as a whole.