Analysis of antigenic structure of Potato Virus M Ukrainian strains

Abstract

Для анализа антигенной структуры белка оболочки двух украинских штаммов М-вируса картофеля (PVM) VI и V7 использованы три моноклональных антитела (МКА) против PVM. Фрагменты ²²Glu-Lys³⁵ и ²²Glu-Lys³⁵ , полученные после ферментативного гидролиза трипсином белков оболочки двух штаммов PVM, распознавались двумя МКА – M6D5 и M9G1. Замена Glu→ Gly в позиции 22 белка оболочки PVMV7 не изменяла распознавания антителами как триптических пеп­тидов, так и белков оболочки этих штаммов. МКА M9G1 и М4С1 конкурировали между собой за участки связывания с молекулой белка оболочки PVM синтетический пептид П14, соответствующий фрагменту Glu-Lys , с различной эффек­тивностью ингибировал взаимодействие МКА M6D5 и M9G1 с фрагментом П14 и белком оболочки U7. Изменение поло­жительного заряда боковой группы Lys³⁵ на отрицательный путем модификации пептидов²²Glu-Lys³⁵ и ²²Glu-Lys³⁵ цитраконовым ангидридом привело к двухкратному усилению реак­ции МКА M9G1 и незначительному снижению реакции МКА M6D5 с модифицированным пептидом. На основании получен­ных результатов установлено, что PVM-специфические эпитопы расположены в N-концевой области белка оболочки. Два эпитопа, распознаваемые МКА M6D5 и M9G1, перекрываются межфу собой и имеют общий участок связывания во фрагмен­те ²²Glu/Glu-Lys³⁵ . Эпитопы, распознаваемые МКА М4С1 и M9G1, либо перекрываются между собой, либо конформационно приближены друг к другу.

Для аналізу антигенної структури білка оболонки двох ук­раїнських штамів М-вірусу картоплі (PVM) VI та V7 викори­стано три моноклональних антитіаа (МКА) проти PVМ. Фрагменти ²²Glu-Lys³⁵ та ²²Glu-Lys³⁵ , одержані після фермен­тативного гідролізу трипсином білків оболонки двох штамів PVM, розпізнавалися двома МКА – M6D5 та M9G1. Заміна Glu -> Gly в позиції 22 білка оболонки PVM V7 не змінювала розпізнавання антитілами як триптичних пептидів, так і білків оболонки цих штамів. МКА M9G1 та М4С1 конкурува­ли між собою за ділянки зв'язування з молекулою білка оболонки PVM. Синтетичний пептид П14, який відповідав фрагментові ²²Glu-Lys³⁵ , з різною ефективністю пригнічував взаємодію МКА M6D5 та M9G1 з фрагментом П14 і білкооболонки РУМ. Зміна позитивного заряду бокової группи на від'ємний шляхом модифікації пептидів ²²Glu-Lys³⁵ та ²²Glu-Lys³⁵ цитраконовим ангідридом призвела до дворазового посилення реакції МКА M9G1 та до незначного зниження реакції МКА M6D5 з модифікованим пептидом. На підставі одержаних результатів встановлено, що PVM-специфічні епітопи розташовані в N-кінцевій області білка оболонки. Два епітопи, які розпізнаються МКА M6D5 та M9G1, перекрива­ються та мають загальну ділянку зв'язування у фрагменті ²²Glu/Glu-Lys³⁵ . Епітопи, які розпізнаються МКА M4C1 та M9G1, або перекриваються між собою, або конформаційно наближені один до одного.

The antigenic structure of two Ukrainian strains V1 and U7 of Potato Virus M (PVM) was studied by using three mouse monoclonal antibodies (MAbs). Tryptic fragments of PVM coat protein (CP) ²²Glu-Lys³⁵ and ²²Glu-Lys³⁵ were found to be recognised by two MAbs, M6D5 and M9G1. The amino acid substitution Glu → Gly at the position 22 of PVM 117 coat protein did not affect antibody binding to both tryptic fragments and PVM CP. Mob M9GJ interfered with MAb M4C1 in dot immunobinding assay. Synthetic peptide P14, corresponding to tryptic fragment ²²Glu-Lys³⁵, inhibited the interaction of MAb M6D5 with CP and peptide P14 more effectively than that of MAb M9G1. The modification of the side chain positive charge of Lys35 to negative one in tryptic peptides ²²Glu-Lys³⁵ and ²²Glu-Lys³⁵ using citraconic anhydride resulted in a two-fold increase of the reaction of MAb M9G1 and slightly reduce the interaction of MAb M6D5 with both fragments. On the basis of these results, it was concluded that three PVM-specific epitopes are located at the N-terminal region and form original immunogenic site of PVM coat protein. MAbs M6D5 and M9G1 recognise sequentially overlapping epitopes and the common site for both epitopes is presented in the fragment ²²Glu/Glu-Lys³⁵. MAbs M4C1 and M9G1 recognise either overlapping, or conformational approximated epitopes.