Maintenance of mesenchymal stem cells culture due to the cells with reduced attachment rate

Abstract

Aim. The classic detachment techniques lead to changes in cells properties. We offer a simple method of cultivating the population of cells that avoided an influence on the surface structures. Methods. Mesenchymal stem cells (MSC) from human umbilical cord matrix were obtained and cultivated in standard conditions. While substituting the culture media by a fresh portion, the conditioned culture medium, where the cells were maintained for three days, was transferred to other culture flacks with addition of serum and growth factors. Results. In the flacks, one day after medium transfer, we observed attached cells with typical MSC morphology. The cultures originated from these cells had the same rate of surface markers expression and clonogenic potential as those replated by standard methods. Conclusions. MSC culture, derived by preserving the cells with reduced attachment ability, actually has the properties of «parent» passage. Using this method with accepted techniques of cells reseeding would allow maintaining the cells that avoided an impact on the cell surface proteins.

Мета. Застосування класичних методик для відкріплення мезенхімальних стовбурових клітин (МСК) від субстрату призводить до змін їхніх властивостей. У даному повідомленні запропоновано простий і доступний спосіб збереження популяції клітин, що уникли впливів на поверхневий апарат. Методи. МСК з матриксу пупкового канатика людини отримували і культивували за стандартною методикою. При заміні культурального середовища на свіжу порцію кондиціоноване середовище, у якому культури знаходилися впродовж трьох днів і яке потенційно містило спонтанно відкріплені клітини, переносили в інший культуральний посуд, додаючи сироватку та ростові фактори. Результати. Через добу після перенесення середовища на дні культурального посуду можна було спостерігати прикріплені клітини типової для МСК морфології, які мали ступінь експресії поверхневих маркерів та клоногенний потенціал, аналогічні таким у культур, пасованих за стандартною методикою. Висновки. Дочірня культура, отримана внаслідок збереження клітин, які спонтанно відкріпились у процесі заміни культурального середовища, фактично, зберігає властивості клітин вихідного пасажу. Запропонований метод доцільно застосовувати додатково до стандартної методики пасування. Це дозволить постійно мати пул клітин, які уникли пошкоджуючих впливів на білки і глікопротеїни поверхні клітини.

Цель. Использование классических методик для открепления мезенхимальных стволовых клеток (МСК) от субстрата приводит к изменению их свойств. В данном сообщении предложен простой и доступный способ сохранения популяции клеток, избежавших влияния на поверхностный аппарат. Методы. МСК из матрикса пупочного канатика человека получали и культивировали по стандартной методике. При замене культуральной среды на свежую порцию кондиционированную среду, в которой культура находилась в течение трех дней, предположительно содержащую спонтанно открепившиеся клетки, переносили в другой культуральный сосуд, добавляя сыворотку и ростовые факторы. Результаты. Через сутки после переноса кондиционированной среды на дне сосуда можно было обнаружить прикрепленные клетки типичной для МСК морфологии, имеющие степень экспрессии поверхностных маркеров и клоногенный потенциал, аналогичные таким культур, пересеянных по стандартной методике. Выводы. Дочерняя культура, полученная в результате сохранения клеток, спонтанно открепившихся в процессе замены культуральной среды, фактически, сохраняет свойства клеток исходного пассажа. Метод целесообразно применять дополнительно к стандартной методике пассирования. Это позволит постоянно иметь пул клеток, избежавших влияния классической процедуры пассирования на белки и гликопротеины поверхности клетки.