Иммуноморфологическое и биохимическое изучение внутриклеточной локализации триптофанил-тРНК-синтетазы высших организмов

Abstract

Исследовали внутриклеточное распределение триптофанил-тРНК-синтетазы (ТРС, КФ 6.1.1.2) в культивируемых клетках почки крупного рогатого скота с использованием очищенных моноспецифинеских поликлональных, а также моноклональных антител к цитоплазматическому ферменту, применяя световую и электронную микроскопию, Количественное содержание ТРС в цитоплазме клеток варьировало в широких пределах. Установлено присутствие ТРС на свободных полисомах и в виде крупных скоплений в цитозоле, на полисомах, связанных с мембранами гранулярного эндоплазматического ретикулума (ГЭР) и с наружной ядерной мембраной. Продукт иммуноцитохимической реакции не выявлен в ядрах, митохондриях, комплексе Гольджи и в области скопления микрофиламентов. При биохимическом исследовании изолированных митохондрий из тканей быка, а также нормальных и опухолевых тканей человека стало возможным выявление с помощью иммунопреципитации и иммуноблотинга ТРС в этих органеллах. Показано наличие общих антигенных детерминант у цитоплазматической и митохондриальной ТРС человека и быка, хотя моноклональные антитела выявляют между ними антигенное различие.

Досліджували внутрішньоклітинний розподіл триптофаніл-тРНК-синтетази (ТРС, КФ 6.1.1.2) у культивованих клітинах нирки великої рогатої худоби з використанням очищених моноспецифічних поліклональних, а також моноклональних антитіл до цитоплазматичного ферменту, застосовуючи світлову та електронну мікроскопію. Кількісний вміст ТРС у цитоплазмі клітин варіював у широких межах. Встановлено присутність ТРС на вільних полісомах і у вигляді великих скупчень в цитозолі, на полісомах, зв’язаних з мембранами гранулярного ендоплазматичного ретикулуму (ГЕР) і з зовнішньою ядерною мембраною. Продукт імуноцитохімічної реакції не виявлено в ядрах, мітохондріях, комплексі Гольджі і в області скупчення мікрофіламентів. При біохімічному дослідженні ізольованих мітохондрій з тканин бика, а також нормальних і пухлинних тканин людини стало можливим виявлення за допомогою імунопреципітації і імуноблотингу ТРС у цих органелах. Показано наявність загальних антигенних детермінант у цитоплазматичній і мітохондріальній ТРС людини і бика, хоча моноклональні антитіла виявляють між ними антигенну відмінність.

Intracellular distribution of tryptophanyl-tRNA synthetase (TRS, EC 6.1.1.2) in cultivated bovine kidney cells MDBK was studied using purified monospecific polyclonal as well as monoclonal antibodies against cytoplasmic enzyme. Both light and electron microscopy was used to visualize the localization of antigen-antibody complexes within cells. The amount of TRS varied within a wide range in cytoplasm of various cells in the same culture. TRS was established to exist at free polyribosomes and as big aggregates in cytosol, at polysomes attached to membranes of rough endoplasmic reticulum as well as to external nuclear membrane. The product of cytochemical reaction was not revealed in nuclei, mitochondria, Golgi apparatus and in the region of microfilaments. Biochemical studies of isolated mitochondria from bovine tissues and from normal and malignant human tissues by means of immunoblotting and immunoprecipitation showed the presence of TRS in these organelles. Human and bovine cytoplasmic and mitochondrial TRS share common antigenic determinants.