Дважды позитивные Т-лимфоциты периферической крови у больных меланомой кожи

Abstract

Цель: изучить содержание дважды позитивных (ДП) Т-лимфоцитов и их субпопуляций в периферической крови больных меланомой кожи (МК) с учетом распространенности опухолевого процесса и патогистологических особенностей первичной опухоли. Объект и методы: обследовано 70 больных МК туловища и конечностей I–IV стадии. Содержание ДП Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺CD8⁺) и их субпопуляций (CD3⁺CD4dimCD8bright и CD3⁺CD4brightCD8dim) в периферической крови изучали методом проточной цитофлуориметрии с использованием моноклональных антител CD3-PC5/ CD4-RD1/CD8-FITC («Beckman Coulter», США). Учет результатов проводили на проточном цитофлуориметре FACScan («Becton Dickinson», США). У пациентов с МК ІВ–ІІС и ІІІА–ІІІВ стадий (микрометастазы) проанализированы результаты адъювантной интерферонотерапии с учетом количества CD3⁺CD4⁺CD8⁺ -, CD3⁺CD4dimCD8bright - и CD3⁺CD4brightCD8dim лимфоцитов в периферической крови, определяемого до лечения. Период наблюдения составил 3 года. В качестве контрольной группы обследовано 37 практически здоровых людей (ПЗЛ). Результаты: в крови больных первично-локализованной МК абсолютное количество CD3⁺CD4⁺CD8⁺ - лимфоцитов увеличено, однако содержание CD3⁺CD4brightCD8dim - и CD3⁺CD4dimCD8bright клеток находится в пределах нормальных значений. С прогрессированием заболевания количество CD3⁺CD4⁺CD8⁺ - лимфоцитов уменьшается до уровня ПЗЛ, при этом развивается выраженный дефицит CD3⁺CD4brightCD8dim - и CD3⁺CD4dimCD8bright - клеток. Высокое содержание CD3⁺CD4⁺CD8⁺ - лимфоцитов у пациентов с МК І–ІІ стадии в большинстве случаев наблюдается при наличии изъязвления первичной опухоли и связано с увеличением количества CD3⁺CD4brightCD8dim - клеток. Количество ДП Т-лимфоцитов у больных с регионарными микрометастазами не зависит от биологических особенностей первичной МК, однако у пациентов с макрометастазами приналичии изъязвления опухоли существенно уменьшается количество CD3⁺CD4brightCD8dim-клеток. Убольных с ремиссией до лечения выявлен повышенный уровень CD3⁺CD4⁺CD8⁺-лимфоцитов, у пациентов с рецидивом он не отличался от такового у ПЗЛ. У больных, не проживших 3 года, до лечения регистрировали низкое содержание CD3⁺CD4brightCD8dim-клеток. Вывод: дальнейшее изучение ДП Т-лимфоцитов у больных МК позволит разработать потенциальные терапевтические стратегии лечения этой категории пациентов и даст возможность прогнозировать ответ на иммунотерапию.

The purpose of the work was to study contents of double positive (DP) T lymphocytes and their subsets in peripheral blood in cutaneous melanoma patients in view of prevalence of tumoral process and pathohistology features primary tumor. Materials and methods: the study was performed in 70 patients with stages I–IV cutaneous melanoma of trunk and extremities. The phenotype of DP T lymphocytes (CD3⁺CD4⁺CD8⁺) and their subsets (CD3⁺CD4dimCD8bright and CD3⁺CD4brightCD8dim) in peripheral blood was determined by flow cytometry using monoclonal antibodies CD3-PC5/CD4-RD1/CD8- FITC («Beckman Coulter», USA). Data acquisition and analysis were performed using FACScan flow cytometer («Becton Dickinson», USA) and CellQuest software. The results of adjuvant interferon therapy of stages ІВ–ІІС and ІІІА–ІІІВ (micrometastases) melanoma patients have been analysed in view of pretreatment contents of CD3⁺CD4⁺CD8⁺, CD3⁺CD4dimCD8bright and CD3⁺CD4brightCD8dim lymphocytes in peripheral blood. The period of supervision lasted 3 years. The control group included 37 healthy subjects. Results: it was revealed that absolute count of peripheral blood CD3⁺CD4⁺CD8⁺ lymphocytes was increased in localized melanoma patients, however content of peripheral blood CD3⁺CD4brightCD8dim and CD3⁺CD4dimCD8bright lymphocytes was recorded at the normal level. During disease count of CD3⁺CD4⁺CD8⁺ lymphocytes was decreased to healthy subject level, thus deficiency of CD3⁺CD4brightCD8dim and CD3⁺CD4dimCD8bright lymphocytes developed. Increased count of CD3⁺CD4⁺CD8⁺ lymphocytes in stages І–ІІ melanoma patients was observed in most cases with presence primary tumor ulceration and it was connected to increase of count of CD3⁺CD4brightCD8dim lymphocytes. The content of DP T lymphocytes didn’t depend on biological features of primary tumor in regional micrometastatic melanoma patients, however number of CD3⁺CD4brightCD8dim lymphocytes was reduced in macrometastatic melanoma patients with ulcerated tumor. The analysis of interferon therapy results has shown that pretreatment level of peripheral blood CD3⁺CD4⁺CD8+ lymphocytes was increased in patients with remission of diseases while it did not differ in patients with relapse vs healthy subjects. Also it was found that pretreatment content of CD3⁺CD4brightCD8dim lymphocytes in patients which died during 3 years was decreased. Conclusion: further study of DP lymphocytes in cutaneous melanoma patients will allow to understand better the potential therapeutic strategies of treatment for these patients and provide the ability to predict response to immunotherapy.