Оптимізація режиму відтавання кріоконсервованої сперми людини при нормо- та патоспермії

Abstract

Внаслідок поширеного розвитку допоміжних репродуктивних технологій актуальним є вдосконалення способів кріоконсервування сперміїв. У роботі досліджено показники морфофункціонального стану кріоконсервованих сперміїв людини в нормі та при патології за різних способів відтавання. Усі зразки витримували над дзеркалом рідкого азоту, подальший нагрів сперміїв здійснювали на водяній бані (37, 50, 60, 70°С) та витримували за кімнатної температури до появи рідкої фази. Морфофункціональний стан сперміїв оцінювали за їхньою рухливістю та життєздатністю, а стан хроматину – за допомогою акридину оранжевого. Встановлено, що режим відтавання при 50°С (із попередньою інкубацією зразків у парах рідкого азоту (–150°С)) після кріоконсервування сперміїв за 3-етапною програмою ефективно зберігає їх рухливість без змін цілісності мембрани та стану нуклеарного хроматину в нормі та при астенозооспермії. Відтавання зразків при кімнатній температурі за тих же умов є найбільш травматичним для сперміїв у випадку як нормо-, так і астенозооспермії.

Вследствие широкого развития вспомогательных репродуктивных технологий актуальным является совершенствование способов криоконсервирования спермиев. В работе исследованы показатели морфофункционального состояния криоконсервированных спермиев человека в норме и с патологией при различных способах оттаивания. Все образцы выдерживали над зеркалом жидкого азота, дальнейший нагрев спермиев осуществляли на водяной бане (37, 50, 60, 70°С) и выдерживали в условиях комнатной температуры до появления жидкой фазы. Морфофункциональное состояние сперматозоидов оценивали, подсчитывая подвижность и жизнеспособность, а состояние хроматина клеток – с помощью акридина оранжевого. Установлено, что режим оттаивания спермиев при 50°С (с предварительной инкубацией образцов в парах жидкого азота (–150°С)) после криоконсервирования по 3-этапной программе эффективно сохраняет их подвижность без изменений целостности мембраны и состояния нуклеарного хроматина при нормо- и астенозооспермии. Оттаивание образцов при комнатной температуре в тех же условиях является наиболее травматичным для спермиев человека в случае как нормо-, так и астенозооспермии.

Due to the widespread development of assisted reproductive technologies an actual task is to improve current methods of sperm cryopreservation. We studied the morphological and functional states of the cryopreserved human sperm in normal and pathological conditions at different regimens of thawing. All samples were maintained above the mirror of liquid nitrogen with further heating of spermatozoa in a water bath (37, 50, 60, 70°C) or maintaining at room temperature until the liquid phase appearance. Morpho- functional state of sperm was estimated by their motility and viability. Assessment of sperm chromatin was carried out using acridine orange staining. It was found that a thawing regimen of sperm at 50°C (with pre-incubation of the samples in liquid nitrogen vapor at –150°C) after sperm cryopreservation by three-stage protocol effectively kept their motility without the changes of membrane integrity and nuclear chromatin state at normo- and asthenozoospermia. Thawing of sperm at room temperature under the same conditions was the most traumatic for human sperm both at normo- and asthenozoospermia.