Криоконсервирование ядросодержащих клеток кордовой крови под защитой непроникающего криопротектора ПЭО-1500

Abstract

Разработка безотмывочных методов криоконсервирования фракции ядросодержащих клеток кордовой крови, в состав которой входит популяция гемопоэтических стволовых клеток-предшественников, является актуальной задачей для их долгосрочного хранения. В работе использована технология криоконсервирования ядросодержащих клеток кордовой крови, включающая выделение популяции клеток оригинальным методом двухэтапного центрифугирования, обработку непроникающим криопротектором полиэтиленоксидом с м. м. 1500 (ПЭО-1500) и замораживание по двухэтапной программе. Установлено, что данная технология позволяет сохранить более 72% CD45+- и 75% CD34+-клеток с показателями жизнеспособности более 83 и 91% соответственно. При этом повышенное содержание активных форм кислорода (в (42,7 ± 6,3)% клеток) на фоне высоких показателей количества клеток и их жизнеспособности может рассматриваться как физиологичный ответ клеток на воздействие факторов криоконсервирования.

Розробка безвідмивних методів кріоконсервування фракції ядровмісних клітин кордової крові, до складу якої входить популяція гемопоетичних стовбурових клітин-попередників, є актуальним завданням для їх довгострокового зберігання. У роботі використовується технологія кріоконсервування ядровмісних клітин кордової крові, яка включає виділення популяції клітин оригінальним методом двоетапного центрифугування, обробку непроникаючим кріопротектором поліетиленоксидом із м. м. 1500 (ПЕО-1500) і заморожування за двоетапною програмою. Встановлено, що представлена технологія дозволяє зберегти більше 72% CD45+- та 75% CD34+-клітин із показниками життєздатності більше 83 і 91% відповідно. При цьому підвищений вміст активних форм кисню (в (42,7 ± 6,3)% клітин) при високих показниках кількості клітин та їх життєздатності може розглядатися як фізіологічна відповідь клітин на вплив факторів кріоконсервування.

Development of wash-free cryopreservation methods for cord blood nucleated cell fraction, including the population of hematopoietic stem/progenitor cells, is an actual task for their long-term storage. Present investigation involved the technique of cord blood nucleated cells cryopreservation, comprising the isolation of cell population by the original two-step centrifugation method, the treatment with non-penetrating cryoprotectant polyethylene oxide with molecular weight of 1500 (PEO-1500) and freezing by the two-step program. This technique enabled to preserve more than 72% CD45+ and 75% CD34+ cells with the viability indices of correspondingly 83 and 91% and higher. Herewith, an increased content of reactive oxygen species (42.7 ± 6.3%) on the background of high cell number and their viability may be considered as a cells’ physiological response to the effect of cryopreservation factors.