Особенности изменения структурно-функциональных характеристик стволовых кроветворных клеток из разных источников после криоконсервирования

Abstract

Проведенный сравнительный анализ структурно-функционального статуса стволовых кроветворных клеток (СКК) фетальной печени (ФП) 14 суток гестации и взрослого костного мозга (КМ) мышей линии СВА/H 4-месячного возраста продемонстрировал не только различия их исходных качественно-количественных характеристик, но и разный ответ на действие факторов криоконсервирования. Клетки ФП или КМ замораживали по разным режимам под защитой 5 и 10% диметилсульфоксида. Для оценки структурно-функциональных характеристик СКК из разных источников использовали методы цитофлуориметрии (содержание CD34+СD38–-клеток), колониеобразования in vivo (КОЕс) и in vitro (КОЕ-ГМ). Установлено, что определенные режимы криоконсервирования способны проявлять эффект селективного обогащения популяций клеток с фенотипическими признаками кроветворных предшественников (CD34+СD38–-клетки). Сопоставление содержания КОЕс, КОЕ-ГМ, СКК и клеток с фенотипом CD34+СD38– показало, что режим криоконсервирования для клеток ФП не является «оптимальным» для КМ. Показано, что при варьировании условий криоконсервирования можно обеспечивать не только «оптимальную» сохранность кроветворных предшественников из ФП и КМ с разным исходным функциональным статусом, но и направленно регулировать его.

Проведений порівняльний аналіз структурно-функціонального статусу стовбурових кровотвірних клітин (СКК) фетальної печінки (ФП) 14-ї доби гестації та дорослого кісткового мозку (КМ) мишей лінії СВА/H 4-місячного віку продемонстрував не тільки відмінності їхніх вихідних якісно-кількісних характеристик, але й різну відповідь на дію чинників кріоконсервування. Клітини ФП або КМ заморожували за різними режимами під захистом 5 і 10% диметилсульфоксиду. Для оцінки структурно-функціональних характеристик СКК із різних джерел використовували методи цитофлуориметрії (вміст CD34+СD38–-клітин), колонієутворювання in vivo (КУОс) та in vitro (КУО-ГМ). Встановлено, що певні режими кріоконсервування здатні виявляти ефект селективного збагачення популяцій клітин із фенотиповими ознаками кровотвірних попередників (CD34+СD38–-клітини). Зіставлення вмісту КОЕс, КУО-ГМ, СКК та клітин із фенотипом CD34+СD38– показало, що режим кріоконсервування для клітин ФП не є «оптимальним» для КМ. Показано, що при варіюванні умов кріоконсервування можна забезпечувати не тільки «оптимальну» збереженість кровотвірних попередників із ФП та КМ і різним вихідним функціональним статусом, а й направлено регулювати його.

The performed comparative analysis of structural and functional status of fetal liver (FL) hematopoietic stem cells (HSCs) of 14 gestation days and adult bone marrow (BM) of 4-month-old CBA/H mice demonstrated not only the differences of their initial qualitative and quantitative characteristics but also different responses to the effect of cryopreservation factors. Either FL or BM cells were frozen according to various regimens under protection of 5 and 10% dimethyl sulfoxide. To estimate structural and functional characteristics of HSCs derived from different sources there were used cytofluorimetry (content of CD34+СD38– cells), methods of colony formation in vivo (CFUs) and in vitro (CFU-GM). It has been established that certain cryopreservation regimens are able to manifest the effect of selective enrichment of cell populations with phenotype of hemopoietic progenitors (CD34+CD38– cells). Comparing the content of CFUs, CFU-GM, HSCs and cells with CD34+CD38– phenotype has shown that cryopreservation regimen for FL cells was not optimal for BM. It has been demonstrated that varying cryopreservation conditions allowed not only to provide optimal preservation rate of hemopoietic progenitors derived from FL and BM with various initial functional status, but to control it purposefully.