Функциональная активность адренокортикоцитов крыс после инкубации в криозащитных средах на основе ДМСО, содержащих эмбриональную телячью сыворотку

Abstract

Изучение функционального состояния клеток на различных этапах криоконсервирования необходимо для создания и усовершенствования протоколов замораживания эндокринных клеток. В работе оценивали влияние инкубации в средах с 5, 7, 10 и 15% диметилсульфоксида (ДМСО), а также в средах с ДМСО и 25% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) на показатели суспензии клеток коры надпочечников: жизнеспособность (МТТ-тест), содержание клеток с активной 3β-гидроксистероиддегидрогеназой, функционально активными митохондриями (тест c JC-1), а также уровень базальной и стимулированной секреции альдостерона. Показано, что присутствие ЭТС в составе криозащитной среды приводило к снижению токсического действия ДМСО на адренокортикоциты во время инкубации, более того, в некоторых случаях после инкубации в средах с ДМСО и ЭТС наблюдалось увеличение содержания клеток с функционально активными митохондриями и клеток с активным стероидогенезом по сравнению с суспензией клеток, не подвергавшихся воздействию криопротектора.

Вивчення функціонального стану клітин на різних етапах кріоконсервування є важливим для створення та удосконалення протоколів заморожування ендокринних клітин. У роботі оцінювали вплив інкубації в середовищах з 5, 7, 10 та 15% диметилсульфоксиду (ДМСО), а також у середовищах з ДМСО та 25% ембріональної телячої сироватки (ЕТС) на показники суспензії клітин кори наднирників: життєздатність (МТТ-тест), вміст клітин з активною 3β-гідроксистероїддегідрогеназою, функціонально активними мітохондріями (тест з JC-1), а також рівень базальної та стимульованої секреції альдостерону. Показано, що присутність ЕТС у складі кріозахисного середовища призводила до зниження токсичної дії ДМСО на адренокортикоцити під час інкубації, більш того, в деяких випадках після інкубації в середовищах із ДМСО й ЕТС спостерігалося збільшення вмісту клітин з функціонально активними мітохондріями та клітин з активним стероїдогенезом у порівнянні з суспензією клітин, що не піддавалися впливу кріопротектора.

Investigation of functional state of cells at various stages of cryopreservation is important for the development and improvement of freezing protocols of endocrine cells. This study assessed the effect of incubation in media with 5, 7, 10, and 15% dimethyl sulfoxide (DMSO), as well as the media with DMSO and 25% fetal bovine serum (FBS) on some indices of adrenal cortex cell suspension: viability (MTT-test), content of cells with active 3β-hydroxysteroid dehydrogenase, functionally active mitochondria (JC-1 test), as well as the level of basal and stimulated aldosterone secretion. It was shown that presence of FBS in a cryoprotective medium reduced the toxic effect of DMSO on adrenocorticocytes during incubation, furthermore in some cases incubation in media with DMSO and FBS led to the increase in the number of cells with functionally active mitochondria and cells with active steroidogenesis if compared with the suspensions with cells not exposed to cryoprotectant solution.