Очистка и свойства лектинов из надземной части растений трех видов рода ястребинка (Hieracium)

Abstract

Из надземной части растений трех видов рода ястребинка – Hieracium aurantiacum, Н. pilosella, Н. sylvularum, принадлежащих семейству Asteraceae, очищены пектины с выходом 61, 126 и 92 мг на 1 кг сырой массы сырья соответственно. Молекулярная масса всех трех лектинов, определен­ная гель-хроматографией на Toyopearl HW-55, составляет 36 кДа. При электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии ДС-Na обнаружена одна зона с молекулярной массой примерно 18 кДа. Очевидно, что лектины ястребинок состоят из двух идентичных субъединиц. При диск-электрофорезе в щелочной (рН 8,9) и кислой (рН 4,3) средах обнаружено по одной зоне. В составе молекул лектинов обнаружено 2,1–2,2 % углеводов. Лектины растений трех видов рода ястребинка лучше всего агглютинируют эритроциты кролика и слабее — эритроциты курицы, барана и человека. Лучшим ингибитором активности всех трех лектинов является N,N' N"',N"'-тетраацетилхитотетраоза, которая в 8 раз сильнее, чем N,N'-диацетилхитобиоза и в 625 раз – чем Н-аиетил-П-глюкозамин. Для гистохимических целей получены конъюгаты лекти­нов с пероксидазой хрена и лектины, меченные ФИТЦ.

З надземної частини рослин трьох видів роду нечуй-вітер (Hieracium aurantiacum, Н. pilosellа, H. sylvularum), які нале­жать до родини Asteraceae, очищено лектини з виходом 61, 126 і 92 мі на 1 кг сирої маси сировини відповідно. Молекулярна маса усіх трьох лектинів, визначена гельхроматографією на Toyopearl HW-55, складає 36 к Да. При електрофорезі в ПААГ у присутності ДС-Na виявлено одну зону з молекулярною масою приблизно 18 к Да. Очевидно, лектини нечуй-вітрів складаються з двох ідентичних субодиниць. При диск-електрофорезі в лужному (рН 8,9) і кислому (рН 4,3) середовищах виявлено по одній зоні. У складі молекул лектинів знайдено 2,1–2,2 % вуглеводів. Лектини рослин трьох видів роду нечуй-вітер найкраще аглютинують еритроцити кроля, слаб­ше – еритроцити курки, барана і людини. Кращим інгібі­тором активності усіх трьох лектинів є N,N'N"',N"'-тетраацетилхітотетраоза, яка у 8 разів є сильніший інгібітор, ніж N ,N' -діацетилхітобіоза, та в 625 разів — ніж N-ацетилD-глюкозамін. Для гістохімічних досліджень отримано кон'югати лектинів з пероксидазою хрону і лектини, мічені ФІТЦ.

From aerial part of three species of the plants of genus hawkweed (Hieracium aurantiacum, H. pilosella, H. sylvularum), family Asteraceae, the lectins have been purified with the yield of 61, 126 and 92 mg per kg of crude drugs, accordingly. The molecular mass of the three lectins as determined by gel filtration on Toyopearl HW-55 is 36 kDa. According to the SDS-PAGE data, the lectins contain one component of molecular mass approximately 18 kDa. The PAGE disc electrophoresis in an alkaline (pH 8.9) and acidic systems (pH 4.3) detected one protein band, that presumes the lectins investigated to consist of one isoform. The sugar component (2.1–2.2 %) was revealed in the lectins. The lectins of three species studied agglutinate rabbit erythrocytes best of all and agglutinate weaker hen, sheep and human erythrocytes. The best inhibitor of lectin activity for three species of genus hawkweed is N,N'‚N'''‚N'''-tetraacethylchitotetraose. This sugar is 8 time stronger inhibitor than N,N'-diacethylchitobiose and 625 time stronger than N-acethyl-D-glucosamine. Peroxidase-lectin conjugates and FITC-labelled lectins for histochemicals applications have been prepared.