Создание системы для переноса генов посредством ретровируса на основе Pr-RSV-C с расширенной хозяйской специфичностью

Abstract

Провирус адаптированного к уткам варианта вируса Pr-RSV-C и его трансформационно-дефектного мутанта послужил основой для создания репликативно-компетентного вектора td da Pr-RSV-C е~ и вируса-помощника td da Pr-RSV-C е PSNeo, необходимого для упаковки рпликативно-дефектного ретровирусного вектора. Для снижения вероятности включения клеточных прото-онкогенов в состав ретровирусного вектора последовательности Е-элемента, предположительно вовлеченные в этот процесс, делетированы. Было показано, что (УГб-клетки, трансформирован­ные последовательностями вируса-помощника td da Pr-RSV-C e'PS'Neo продуцируют вирусные белки, в том числе p27gag7 на уровне, необходимом для. сборки репликативно-дефектного ретровирусного вектора. Помимо этого, из-за модифицирования генома вируса-помощника не происходит включения его собственной РНК в состав вириона и сборки полноценной инфекционной вирусной частицы. Это подтверждается тестированием супернатантов упаковочных клонов методом обратной транскрипции: большинство из них не показывают включения [3Н]ТТР в реакции обратной транскрипции, характерного для репликативно-компетентного вируса.

Провірус адаптованого до качок варіанту вірусу Pr-RSV-C та його трансформаційно-дефектного мутанту став основою для створення реплікативно-компетентного вектора td da Pr-RSV-C е та. вірусу-помічника td da Pr-RSV-C е PS Neo, необхідного для упаковки реплікати&но-дефектного ретро­вірусного вектора. Для того щоб знизити вірогідність вклю­чення клітинних протоопко генів до складу ретровірусного вектора, послідовності Е-елементу, які можуть бути залучені до цього процесу, делетовано. Було показано, що QTb-клітини, трансформовані послідовностями вірусу-помічника td da PrRSV-C е PS Neo, продукують вірусні білки, зокрема p27gag, у кількості, необхідній для складання реплікативно-дефектного ретровірусного вектора. Геном вірусу-помічника модифіковано таким чином, що його власна РНК не включається до складу віріону та не відбувається складання повноцінної інфекційної частинки. Цей факт підтверджено тестуванням супернатантів пакуючих клонів методом зворотної транскрипції: більшість з них не показала включення HTTP у реакції зворотної транскрипції, характерного для регигікативно-ком­петентного вірусу,

We have constructed retroviral vector td da Pr-RSV-C e and helper virus td da Pr-RSV-C e' PS'Neo based on the duck-adapted variant of Pr-RSV-C with the extended host ranger and its transformation-defective mutant. To decrease the risk of transducing cell proto-oncogencs, E-element, supposedly involved in this process, was deleted. In order to obtain helper cell line the QT6 cells have been transfected by helper phismid p td da Pr-RSV-C e'PS~Neo. Packaging cells produce viral proteins, including p27gag, but intact helper virus is not detectable in reverse trans criptaxe assay.