Клонирование кДНК, кодирующей С-концевую часть тирозил-тРНК синтетазы млекопитающих, с использованием ПЦР-амплифицированного радиоактивно меченного гибридизационного зонда

Abstract

Для скрининга к ДНК-библиотеки методом полимеразной цепной реакции осуществлен синтез радиоактивно меченного гибридизационного зонда с высокой удельной активностью (3,5· 109 имп·мин–1·мкг–1), специфичного к тирозил-тРНК синтетазе млекопитающих. Проведен скрининг к ДНК-библиотеки печени быка и получен клон, соответствующий указанному ферменту. Секвенирование к ДНК-вставки показало, что данный клон кодирует С-концевую часть тирозил- тРНК синтетазы из печени быка Обнаружена гомология аминокислотной последовательности С-концевого некаталитического домена тирозил-тРНК синтетазы с новым цитокином – моноцит-активирующим полипептидом П.

Для аналізу кДНК-бібліотеки методом полімеразної ланцюго­вої реакції проведено синтез радіоактивно міченого гібриди­заційного зонду з l високою питомою активністю (3,5 ·109 імп·хв · мкг ) , специфічного до тирозил-тРНК син­тетази ссавців. Проведено скринінг кДНК-бібліотеки печінки бика та одержано клон, що відповідає вказаному ферменту. Секвенування кДНК показало, що отриманий клон кодує С-кінцеву частину тирозил-тРНК синтетази печінки бика. Виявлена гомологія амінокислотної послідовності С-кінцевого некаталітичного домена тирозил-тРНК синтетази з новим цитокіном – моноцит-активуючим поліпептидом II.

Radioactive probe of high activity (3.5·109 cpm/μg) specific to mammalian tyrosyl-tRNA synthetase has been synthesized by polymerase chain reaction. Bovine liver cDNA-library has been screened and specific clone has been detected. Sequencing of cDNA insert shows that the done encodes C-terminal part of bovine tyrosyl-tRNA synthetase. C-terminal non-canalytic domain of mammalian tyrosyl-tRNA synthetase shares homology of amino acid sequence with a novel cytokine – endothelial-monocyte activating polypeptide II.