К вопросу о надмолекулярной организации нуклеоидов эукариот

Abstract

Свойства нуклеоидов, выделенных из клеток лейкоза L1210 мышей, исследовали методами капиллярной эластовискозиметрии и седиментации. Изучалось действие на нуклеоиды тиолов (2-меркаптоэтанола, дитиотреитола), проназы Р, РНКазы А, этанола, трихлорацетата натрия, нагревания до 60 и 95 °С. Показано, что повреждение каркаса нуклеоидов тиолами и проназой вызывает декомпактизацию комплекса без потери доменами ДНК суперспиральной конформации. Декомпактизация структуры комплекса наблюдается также в том случае, если выделенные нуклеоиды подвергаются действию РНКазы А в среде с низкой ионной силой; в других вариантах ферментных обработок декомпактизующего действия РНКазы А на нуклеоид не обнаружено. Показано, что нагревание препаратов нуклеоидов до температуры плавления двойной спирали ДНК приводит к полной релаксации суперспиральных доменов и деградации комплекса.

Властивості нуклеоїдів, виділених з клітин лейкозу L1210 мишей, досліджували методами капілярної еластовіскозиметрії і седиментації. Вивчали дію на нуклеоїди тіолів (2-меркаптоетанолу, дитіотреїтолу), пронази Р, РНКази А, етанолу, трихлорацетату натрію, нагрівання до температур 60 і 95 °С. Показано, що пошкодження каркаса нуклеоїдів тіолами і проназа спричиняє декомпактизацію комплексу без втрати доменами ДНК суперспіральної конформації. Декомпактизація структури комплексу спостерігається також у тому разі, якщо виділені нуклеоїди піддаються дії РНКази А в середовищі з низькою іонною силою; в інших варіантах ферментних обробок декомпактизувальної дії РНКази А на нуклеоїд не виявлено. Показано, що нагрівання препаратів нуклеоїдів до температури плавлення подвійної спіралі ДНК призводить до повної релаксації суперспіральних доменів і деградації комплексу.

Properties of the nucleoids isolated from murine leukemia L1210 cells were studied using capillary viscoelastometry and sedimentation methods. Thiols (2-mercaptoethanol, dithiothreitol), pronase P, RNAse A, ethanol, sodium trichloracetate, as well as heating to 60 °C and 95 °C have been studied for their effects on nucleoids. Nucleoid cage damage by thiols or pronase has been shown to cause decompactization of the complex without loss of superhelical conformation by DNA domains. Decompactization of the complex structure is also observed when isolated nucleoids are exposed to RNAse A in the medium with low ionic strength; no decompactizing effect of RNAse A on the nucleoid structure has been revealed in other variants of enzyme treatments. Heating of the nucleoid preparations up to the "melting temperature" of the DNA double helix is shown to induce total relaxation of superhelical domains and degradation of the complex.