Мягкий и эффективный метод пермеабилизации клеток животных и человека

Abstract

Одним из наиболее перспективных методов для изучения открытой недавно субклеточной организации ряда метаболических процессов и механизмов их протекания в высших эукариотах является использование пермеабилизованных клеток. Существующие методы пермеабилизации предлагают довольно жесткую обработку мембран, приводящую к потере интегральности внутриклеточного содержимого. В настоящей работе для пермеабилизации клеток животных и человека использован детергент мягкого действия, растительный гликозид сапонин. Это вещест­во оказалось практически единственным из тестированных, использование которого позволило обеспечить, с одной стороны, существенную сохранность внутриклеточной организации и, с другой, – доступ экзогенных макромолекул внутрь клетки. Разработаны щадящие условия перфо­рации цитоплазматических мембран, отличающиеся для прикрепленных к поверхности и находя­щихся в суспензии клеток. Показана высокая функциональная активность пермеабилизованных клеток и доступность интерьера клеток флюоресцентно меченным белкам.

Одним з найперспективніиіих методів вивчення відкритої недавно субклітинної організації ряду метаболічних процесів і механізмів їх протікання у вищих еукаріотах є використання пермеабілізованних клітин. Існуючі методи пермеабілізації пропонують доволі жорстку обробку мембран, що призводить до втрати інтегральності вмісту клітин. У цій роботі для пермеабілізації клітин тварин і людини використано детер­гент м'якої дії – рослинний глікозид сапонін. Ця речовина виявилася практично єдиною із тестованих, використання якої дозволило забезпечити, з одного боку, значне збереження внутрішньоклітинної організації і, з другого, – доступ екзо­генних макромолекул всередину клітин. Розроблено м'які умо­ви перфорації цитоплазматичних мембран, які різняться для прикріплених до поверхні і перебуваючих у суспензії клітин. Показано високу функціональну активність пермеабілізованих клітин та доступність інтер'єру клітин флюоресцентно мі­ченим білкам.

The permeabilized cell system appears one of the most promising methods to study recently discovered subcellular organization of some metabolic processes and the functional mechanisms involved. The existing permeabilization procedures offer rather harsh membrane treatment which leads to the loss of cell integrity. The plant glycoside saponin was used to permeabilize human and animal cells in this work. The saponin treatment is found to provide both essential conservation of intracetlular organization and unlimited access of exogenous macromolecutes to the inside of cell. The permeabilization conditions are slightly different for immobilized cells and cells in suspension. High functional activity of permeabilized cells as well as the availability of the interior of cells to fluorescently labeled macromolecules are demonstrated.