Характеристика каталитической активности in vitro рибозима, специфичного к tat-PHK вируса иммунодефицита человека типа I

Abstract

Исследованы основные свойства каталитической активности in vitro рибозима модели «головка молотка», специфичного к tat-PHK вируса иммунодефицита человека типа I. Подтверждена обнаруженная нами ранее абсолютная зависимость активности рибозима от присутствия в реакционной среде спермидина ( помимо Mg2+ ). Определена оптимальная концентрация ионов Mg2+ , составившая 5–10 мМ. При определении температурного оптимума реакции, равного 30 °С, выявлено активирующее влияние 20 % формамида при температуре 15 °С. Установлена зависимость эффективности расщепления субстратной РНК от времени реакции.

Досліджено основні властивості каталітичної активності in vitro рибозима моделі «головка молотка», специфічного до tat-PHK вірусу імунодефіциту людини типу І. Підтверджено знайдену нами раніше абсолютну залежність активності рибозима від присутності у реакційному середовищі спермідину (окрім Mg2+ ). Визначено оптимальну концентрацію іонів Mg2+ яка складає 5–10 мМ. При визначенні температурного оптимума реакції, що дорівнює 30 °С, виявлений активуючий вплив 20 % формаміду при температурі 15 °С. Встановлено залежність ефективності розщеплення субстратної РНК від часу протікання реакції.

Essential properties of catalytic activity in vitro of the anti-tat RNA (HIV-I) hammerhead ribozyme have been studied. Spermidine-dependencies, discovered by us earlier, has supported. Optimal concentration of magnesium ion were established and was equal 5–10 mM. Temperature optimum of reaction was 30 °C. 20 % formamide has stimulating influence on efficiency of the cleavage at 15 °C. Time-dependence course of efficiency of reaction also were carried out.