Транспорт ионов натрия на ранних этапах дифференцировки клеток нейробластомы человека, индуцированной рекомбинантным интерфероном-альфа 2b (лафероном)

Abstract

Исследовали влияние рекомбинантного интерферона (ИФН)-альфа 2b (лаферона) на транспорт ионов ²²Na⁺ в клетках нейробластомы человека линии IMR 32. Показано, что ИФН-альфа 2b (600 ME/мл) к концу первых суток воздействия тормозит пролиферацию и индуцирует морфологиче­скую дифференцировку примерно 50 % культивируемых клеток. Переход клеток в дифференциро­ванное состояние сопровождается изменением потоков ионов натрия через плазматическую мембрану. В первые минуты после воздействия ИФН-альфа 2b входящий поток ионов ²²Na⁺ в недифференцированных клетках уменьшается на 20 % по сравнению с контролем. В этих клетках деполяризация плазматической мембраны смесью вератрина (200 мкг/мл) и токсина скорпиона Leiurus quinquestriatus (10 мкг/мл) вызывает увеличение входящего потока ионов ²²Na⁺ на 50 %. В дифференцированных клетках при деполяризации их нейротоксинами входящий поток ионов ²²Na⁺ в 3.2 раза больше, чем в недифференцированных. Тетродотоксин (ТТХ) в концентрации 4 · 10⁻⁷ М полностью блокирует входящий поток в недифференцированных клетках, а в дифферен­цированных–уменьшает его на 50 %. Вероятно, это свидетельствует о том, что в дифферен­цированных ИФН-альфа 2b клетках нейробластомы появляются потенциалуправляемые ТТХ-нечувствительные натриевые каналы. Активность Na⁺, К⁺-АТРазы в первые минуты воздействия ИФН-альфа 2b уменьшается в 2 раза. После 22 ч культивирования клеток в среде, содержащей ИФН-альфа 2b, она восстанавливается до 80 % от контрольного уровня. Полученные in vitro данные можно использовать для оценки антипролиферативного действия лаферона in vivo.

Досліджували вплив рекомбінантного інтеррону (IФН)-альфа 2b (лаферону) на транспорт іонів Na⁺ в клітинах нейробластоми людини лінії IMR 32. Показано, що ІФН-альфа 2b (600 МЕ/мл) наприкінці першої доби дії гальмував проліферацію та викликав морфологічне диференціювання принаймні 50 % культивованих клітин. Перехід клітин у диференційований стан супроводжувався зміною потоків іонів нат­рію через плазматичну мембрану. перші хвилини після дії ІФН-альфа 2b вхідний потік іонів Na в недиференційованих клітинах зменшувався на 20 % порівняно з контролем. У цих клітинах деполяризація плазматичної мембрани, обумовлена внесенням вератрину (200 мкг/мл) та токсину скорпіна Leiurus quinquestriatus (200 мкг/мл), призводила до збільшення вхідного потоку іонів Na⁺ на 50 %. У диференційованих клітифрх при деполяризації їх нейротоксинами вхідний потік іонів Na⁺ був у 3,2 разу більшим, ніж у недиференційованих. Тетродотоксин (ТТХ) у концентрації 4·10⁻⁷ М повністю блокував вхідний потік у недиференційованих клітинах. У диференційованих клітинах вказаний потік під впливом ТТХ зменшувався на 50 %. Це є свідченням того, що в процесі диференціювання, індукованого ІФН-альфа 2b, у плазматичних мембранах клітин IMR 32 з'являються потенціалзалежні нечутливі до ТТХ натрієві канали. Активність Na⁺ , К⁺ -АТРази в перші хвилини дії IФН-альфи 2b зменшувалася у 2 разу порівняно з контролем. Протягом першої доби від почат­ку дії ІФН-альфа 2b активність ферменту відновлювалася і складала 80 % від контрольного рівня. Отримані in vitro дані дають можливість наблизитися до розуміння механізмів нейроімунної взаємодії та оцінки антипроліферативної дії лаферону in vivo.

We investigated the sodium transport induced by the recombinant interferon (IFN)-alpha 2b (laferon) in the human neuroblastoma cell line JMR 32. It has been found that IFN-alpha 2b (600 lU/ml) inhibited cell proliferation and induced morphological differentiation in 50 % of these cells by the end of the first day of incubation. This process was accompanied by an alteration in the ionic transport across the cell membrane. We have demonstrated that in undifferentiated cells, IFN-alpha 2b decreased Na influx by 20 % compared to the control cells. The membrane depolarization in these cells, induced by veratrine (200 ng/ml) in the quesence of Leiurus quinauestriatus venom (10 fig/ml), increased Na influx by 50 %. In the depolarized differentiated cells, Na influx was 3.2 times larger than in the depolarized undifferentiated cells. Tetrodotoxin (4·10⁻⁷ M) completely blocked Na influx in the depolarized undifferentiated cells and reduced this influx by 50 % in the depolarized differentiated cells. These data indicate that voltage-operated tetrodotoxin-insensitive sodium channels are expressed in the neuroblastoma cells after the differentiation by IFN-alpha 2b. The Na⁺ , K⁺ -ATPase activity has decreased by half within 5 minutes of the IFN-alpha 2b addition. The enzyme activity increased up to 80 % of the control level after 22 h of exposure to IFN-alpha 2b. The in vitro data encouraged pilot studies to evaluate the in vivo antiproliferative effect of laferon.