ПДРФ-анализ и диагностика гемофилии А при помощи ДНК-зондов

Abstract

Методом блот-гибридизации изучен полиморфизм длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) ДНК-последовательностей, тесно сцепленных (зонд St-14) или расположенных внутри, т. е. представляющих собой фрагменты гена фактора (F) VIII: С свертывания крови (р51.61 и р1.8), в ленинградской популяции (контроль) — в семьях высокого риска и непосредственно у больных гемофилией А. Частота ПДРФ-аллелей, выявленная этими зондами, во всех исследованных группах в целом хорошо коррелирует с аналогичными показателями для западноевропейских и североамериканских популяций. В исследованиях с зондом St-14 обнаружены два дополнительных, ранее неописанных аллеля 4,35 и 4,2 т. п. о. Подтверждена высокая информативность внесенного зонда St-14 и сравнительно низкая — внутригенных зондов. Совместное использование трех зондов в семьях высокого риска позволило установить диагноз и подтвердить гетерозиготное носительство гена гемофилии A у 11 u отвергнуть его у двух -женщин — близких родственников пробандов, а также с вероятностью более 95 % осуществить пренатaльную диагностику гемофилии А у плода 9-й недели развития.

Методом блот-гібридизації вивчено поліморфізм довжини рестрикційних фрагментів (ПДРФ) ДНК-послідовностей, тісно зчеплених (зонд St-14) або розташованих усередині, тобто які представляють собою фрагменти гена фактора (F) VIII:С згортання крові (р51.61 і р1.8), у ленінградській популяції (контроль) – у родинах високого ризику і безпосередньо у хворих на гемофілію А. Частота ПДРФ-алелів, виявлена цими зондами, у всіх досліджених групах у цілому добре корелює з аналогічними показниками для західноєвропейських та північноамериканських популяцій. У дослідженнях із зондом St-14 виявлено два додаткових, раніше не описаних алелі 4,35 і 4,2 тис. п. о. Підтверджено високу інформативність внесеного зонда St- 14 і порівняно низька – внутрішньогенних зондів. Спільне використання трьох зондів у родинах високого ризику дозволило встановити діагноз і підтвердити гетерозиготне носійство гена гемофілії A у 11 і відкинути його у двох жінок – близьких родичів пробандів, а також з імовірністю більше 95 % здійснити пренатaльную діагностику гемофілії А у плоду 9 -го тижня розвитку.

RFLP analysis of DNA sequences close to (probe St-14) or inside Factor VIII : C gene (probes p. 51.61 and probe p. 1.8) was carried out in the Leningrad population (control group), in the families with high risk of haemophilia A as well as in patients with haemophilia A. The frequency of corresponding alleles in normal and haemophilia A X chromosomes were in good concordance with relative allelic frequencies in populations of Western Europe and North America. Two rare and previously unkown alleles (4.2 and 4.35 base pairs) were detected in studies with St-14 probe. High informativity of closely linked St-14 probe and low predictive values of tested intragenetic probes have been confirmed. Using RFLP technique with 3 tested probes haemophilia A heterozygotcs carriers have been diagnosed in 11 and rejected in 2 close female relatives of haemophilia patients. Prenatal diagnosis of haemophilia A in a 9-week embryo has been perfotned.