ДНК-диагностика и подходы к генной терапии наследственного дефицита α₁-антитрипсина

Abstract

Из библиотеки к ДНК печени человека на экспрессионном векторе λgt11 выделен ряд клонов, содержащих последовательности кДНК α₁-антитрипсина (AT). Анализ нуклеотидной последовательности полученных клонов показал, что в их составе отсутствуют последовательности (30–150) нуклеотидов, кодирующие 5'-конец мРНК AT. Объединением последовательностей к ДНК AT и последовательностей гена AT в уникальном Cfr10.1-сайте экзона II получена кДНК AT, включающая кодоны мРНК AT, начиная с позиции +2. Выделенная к ДНК AT использована для ДНК-диагностики наследственного дефицита AT в семьях носителей мутации в популяциях СССР и ГДР. Выявлено сцепление генотипа при наследственной недостаточности AT с отсутствием полиморфного MaeIIІ-сайта в экзоне III гена AT.

Із бібліотеки кДНК печінки людини на експресійному векторі λgt11 виділено низку клонів, що містять послідовності кДНК α₁-антитрипсину (AT). Аналіз нуклеотидної послідовності отриманих клонів показав, що в їхньому складі відсутні послідовності (30-150) нуклеотидів, які кодують 5'- кінець мРНК AT. Об'єднанням послідовностей кДНК AT і послідовностей гена AT в унікальному Cfr10.1-сайті екзона II одержано кДНК AT, що містить кодони мРНК AT, починаючи з позиції +2. Виділену кДНК AT використано для ДНК-діагностики спадкового дефіциту AT у сім'ях носіїв мутації в популяціях СРСР і НДР. Виявлено зчеплення генотипу при спадковій недостатності AT з відсутністю поліморфного MaeIIІ-сайта в екзоні III гена AT.

The recombinant clones synthesizing immunoreactive α₁-antitrypsin were isolated from expression library of human liver cDNA. Their sequencing has shown that they contain AT cDNAs lacking 20–100 codons from 5'terminal region of AT cRNA. These clones were used as probes for the diagnosis of inherited AT deficiency based on linked Maelll polymorphism. cDNA clones including all the codons for mature AT starting from +2 codon are obtained to construct bacterial strains-producents of AT as well as of recombinant DNAs necessary for gene therapy of AT deficiency.