Замена groEL гена Escherichia coli его гомологом из Sinorhizobium meliloti

Abstract

В работе показано, что ген groEL S. meliloti, кодирующий субъединицы шаперонина с молекулярной массой 60 кДа, комплементирует делецию гена groEL Е. coli, осуществленную путем замены groEL на nptll ген с помощью трансдукции фагом РI При этом для экспрессии гена groEL из S. meliloti в клетках Е. coli использована плазм ида с промотором арабинозного оперона Е. coli, что позволило тонко регулировать синтез шаперонинов содержанием арабинозы и глюкозы в среде выращивания. Метод замен хромосомного гена groEL на гетерологичный groEL, примененный в данной работе, позволяет изучать свойства гомологичных шаперонинов в клетке, не несущей дополнительно температурочувствительных шаперонинов и, таким образом, избежать нежела­тельного взаимодействия шаперонинов различного происхождения и включения в один шаперонин гетерологичных субъединиц.

У роботі показано, що ген groEL S. meliloti, який кодує субодиниці шапероніна з молекулярною масою 60 кДа, компигменту є делецію гена groEL Е. coli, здійснену шляхом заміни groEL на nptll ген за допомогою трансдукції фагом Р1. При цьому для експресії гена groEL з S. meliloti в клітинах Е. coli використано плазміду з промотором арабінозного оперону Е. coli, що дозволило тонко регулювати синтез шаперонінів кількістю арабінози і глюкози в середовищі вирощування. Метод заміни хромосомного гена groEL на гетерологічний groEL дозволяє вивчати властивості гомологічних шаперо­нінів у клітині, яка не несе додатково температурочутливих иіаперонінів і, таким чином, уникнути небажаної взаємодії иіаперонінів різного походження і включення в один шаперонін гетерологічних субодиниць.

We show that groEL gene from S. meliloti coding for chaperonin's subunits with molecular weight 60 kDa complements deletion of groEL gene of E. coli accomplished by replacement of groEL by nptll gene using PI phage transduction. For expression of groEL gene from S. meliloti in E. coli cells we used plasmid with E. coli arabinose promoter allowing tight regulation of chaperonin biosynthesis by varying concentration of arabinose and glucose in growth medium. The method of replacement of chromosomal groEL gene by heterologous groEL allows investigation of chaperonin's behavior in a cell that does not carry additionally temperature sensitive chaperonins and thus allows to avoid undesirable interaction of chaperonins of differen origin and inclusion of heterologous subunits into the same chaperonin.