Изучение первичной структуры бактериальной формиатдегидрогеназы. Определение N-концевой аминокислотной последовательности и выделение цистеинсодержащих пептидов

Abstract

Осуществлена иммобилизация НАД-зависимой формиатдегидрогеназы из метилотрофных бактерий Pseudomonas sp101 на тиоловых носителях. Выделены и охарактеризованы цистеинсодержащие пептиды. Проведена локализация остатка цистеина, ответственного за проявление каталитической активности фермента. Определена N-концевая аминокислотная последовательность формиатдегидрогеназы.

Здійснено іммобілізацію НАД-залежної форміатдегідрогенази з метилотрофних бактерій Pseudomonas sp101 на тіолових носіях. Виділено та охарактеризовано цистеїнвмісні пептиди. Проведено локалізацію залишка цистеїну, відповідального за прояв каталітичної активності ферменту. Визначено N-кінцеву амінокислотну послідовність форміатдегідрогенази.

NAD-dependent formate dehydrogenase from methylotrophic bacteria of Pseudotnonas sp101 was immobilized on thiopropyl-Sepharose 6B and CPG/Thiol activated by 2,2'-di-pyridyl disulphide via the thiol-disulphide exchange reaction. A procedure for the tryptic digestion of the immobilized enzyme was optimized. Cysteine-containing tryptic peptides were isolated and partially characterized. The peptide which contained the essential cysteine residue responsible for the catalytic enzyme activity was located. A method for the determination of the N-terminal amino acids after fragmentation of the immobilized protein was developed. The N-terminal amino acid sequence of the formate dehydrogenase immobilized via its cysteine residues on a controlled porous glass was determined.