Development of monoclonal antibody against protein Rictor, a component of the mTORC2 complex

Abstract

Aim. Rictor is a component of the protein complex mTORC2 that is activated by growth factors and regulates cell growth, survival and migration. Here, we describe the development of the Rictor specific monoclonal antibody and characterize its suitability for various immunological assays. Methods. Hybridoma technology has been used for the monoclonal antibody production. Immunization was carried out with the recombinant N-terminal fragment of human Rictor expressed in E. coli as a GST-tagged fusion protein. Results. Specific monoclonal antibody (mAb) against Rictor has been developed. Conclusions. The generated mAb specifically recognizes the recombinant and endogenous Rictor and is suitable for Western blotting, immunoprecipitation, and immunofluorescence assays of mammalian cells. This mAb will be a useful tool for the investigations of a physiological role of Rictor as well as the function of the mTORC2 in general.

Мета. Rictor є унікальним компонентом білкового комплекса mTORC2, що активується ростовими факторами та регулює ріст клітин, виживання та міграцію. В даній статті описано процедуру отримання моноклональних антитіл, специфічних до Rictor, а також особливості їх використання у різноманітних імунологічних методах аналізу. Методи. Для отримання моноклональних антитіл було використано гібридомну технологію. Імунізацію проводили рекомбінантним GST-таг злитим N-термінальним фрагментом Rictor, синтезованим в E. coli. Результати. Отримано специфічні моноклональні антитіла проти Rictor. Висновки. Отримані моноклональні антитіла специфічно розпізнають рекомбінантний та ендогенний Rictor в Вестерн-блот аналізі, імунопреципітації та імунофлюорисценції клітин ссавців, та можуть бути використані як необхідний інстумент досліджень при вивченні як індивідуальної фізіологічної ролі Rictor в клітині, так і в складі комплекса mTORC2 в цілому.

Цель. Rictor является уникальным компонентом белкового комплекса mTORC2, который активируется ростовыми факторами и регулирует рост клеток, выживание и миграцию. В данной статье описано процедуру получения моноклональных антител, специфичных к Rictor, а также особенности их использования в различных иммунологических методах анализа. Методы. Для получения моноклональных антител была использована гибридомная технология. Иммунизацию проводили рекомбинантным GST-таг слитым N-терминальным фрагментом Rictor, синтезированном в E. coli. Результаты. Получены специфические моноклональные антитела против Rictor. Выводы. Полученные моноклональные антитела специфично распознают рекомбинантный и эндогенный Rictor в Вестерн-блот анализе, иммунопреципитации и иммунофлюорисценции клеток млекопитающих, и могут быть использованы как необходимый инстумент исследований при изучении как индивидуальной физиологической роли Rictor а в клетке, так и в составе комплекса mTORC2 в целом.