Выбор криозащитной среды для витрификации суспензии эмбриональных фибробластоподобных клеток

Abstract

Определяли состав криозащитных сред, позволяющих исключить кристаллизацию при быстром замораживании и отогреве в стандартных криопробирках, а также исследовали влияние экспозиции и криоконсервирования в этих средах на жизнеспособность эмбриональных фибробластоподобных клеток. В состав витрифицирующихся растворов включали диметилсульфоксид (ДМСО), этиленгликоль (ЭГ), 1,2-пропандиол (1,2-ПД), сахарозу и визуально определяли наличие или отсутствие кристаллизации при замораживании и отогреве. Для витрификации суспензии клеток были отобраны два раствора, обозначенные ДЭПС-1 (10% ДМСО, 20% ЭГ, 20% 1,2-ПД, 0,5 М сахарозы) и ДЭПС-2 (10% ДМСО, 15% ЭГ, 15% 1,2-ПД, 1 М сахарозы). После экспозиции в ДЭПС-1 и ДЭПС-2 наблюдалось снижение сохранности и эффективности прикрепления клеток к пластику по сравнению с контролем. После замораживания-отогрева в растворе ДЭПС-2 сохранность клеток снижалась на 30% по сравнению со значениями до замораживания, а в ДЭПС-1 не изменялась, клетки прикреплялись к пластику и пролиферировали. Показана возможность витрификации суспензии эмбриональных фибробластоподобных клеток под защитой многокомпонентных криозащитных сред при быстром замораживании в стандартных пластиковых криопробирках.

Визначали склад кріозахисних середовищ, які дозволяють виключити кристалізацію під час швидкого заморожування та відігрівання в стандартних кріопробірках, а також досліджували вплив експозиції та кріоконсервування в цих середовищах на життєздатність ембріональних фібробластоподібних клітин. До складу розчинів, що вітрифікуються, вводили диметил- сульфоксид (ДМСО), етиленгліколь (ЕГ), 1,2-пропандіол (1,2-ПД), сахарозу і візуально визначали кристалізацію чи ії відсутність під час заморожування та відігрівання. Для вітрифікації суспензії клітин було відібрано два розчини: ДЕПС-1 (10% ДМСО, 20% ЕГ, 20% ПД, 0,5 М сахарози) і ДЕПС-2 (10% ДМСО, 15% ЕГ, 15% 1,2-ПД, 1 М сахарози). Після експозиції в ДЕПС-1 і ДЕПС-2 спостерігали зниження збереженості та ефективності прикріплювання клітин до пластику в порівнянні з контролем. Після заморожування-відігрівання в ДЕПС-2 збереженість клітин знижувалась на 30% в порівнянні з показником до заморожування, а в ДЕПС-1 не змінювалась і клітини проліферували в культурі. Показано можливість вітрифікації суспензії ембріональних фібробластоподібних клітин у багатокомпонентних кріозахисних середовищах при швидкому заморожуванні в стандартних пластикових кріопробірках.

The paper covers the search of cryoprotective medium composition, allowing to avoid the crystal formation during rapid freezethawing in standard cryovials, as well as the effect of exposure and freezing-thawing in the media on survival of fetal fibroblast-like cells. The composition of vitrification media included dimethyl sulfoxide (DMSO), ethylene glycol (EG), 1,2-propane diol (1,2-PD) and sucrose. The applicability of the media was visually assesed by presence or absence of crystal formation during freeze-thawing, and two media were selected for vitrification of cell suspensions: DEPS-1 (10% of DMSO, 20% of EG, 20% of 1,2-PD and 0,5 M of sucrose) and DEPS-2 (10% of DMSO, 15% of EG, 15% of 1,2-PD and 1 M of sucrose). Exposure to DEPS-1 and DEPS-2 led to decrease in cell survival and ability to adhere to plastic. After freeze-thawing in DEPS-2 the cell survival decreased by 30% comparing to the values before freezing, and in DEPS-1 no changes were observed and the cells proliferate in culture. Thus the possibility of fetal fibroblast-like cell suspension to be vitrified in multicomponent cryoprotective media during rapid freezing in standard plastic cryovials was shown.