Жизнеспособность клеток эмбриональной печени человека различного фенотипа после криоконсервирования

Abstract

Исследовали влияние стандартной процедуры криоконсервирования на жизнеспособность различных субпопуляций кроветворных клеток эмбриональной печени. Определяли жизнеспособность клеток специфического фенотипа по окрашиванию пропидиум иодидом (PI) и мечению моноклональными антителами CD34, CD45, AC133 и Gly-A. Колониеобразующую активность суспензии эмбриональной печени человека (ЭПЧ) – методом культивирования в метилцеллюлозной среде. Криоконсервирование снижает жизнеспособность стволовых кроветворных клеток (СКК) на 20-30%, эритроидно коммитированных предшественников менее чем на 10%. Колониеобразующая активность криоконсервированных стволовых клеток подтверждает адекватность измеренных значений их жизнеспособности. Полученные результаты свидетельствуют о лабильности СКК к действию низких температур и необходимости оптимизации используемых параметров их криоконсервирования.

Вивчали вплив стандартної процедури кріоконсервування на життєздатність різних субпопуляцій кровотворних клітин ембріональної печінки. Життєздатність клітин специфічного фенотипу визначали по фарбуванню пропідіум іодидом та міченню моноклональними антитілами CD34, CD45, AC133 та Gly-A. Колонієутворюючу активність суспензії ембріональної печінки людини визначали методом культивування в метилцелюлозному середовищі. Кріоконсервування знижує життєздатність стовбурових кровотворних клітин на 20-30%, комітованих еритроїдних попередників менше, ніж на 10%. Колонієутворююча активність кріоконсервованих стовбурових клітин підтверджує адекватність виміряних значень життєздатності. Отримані результати свідчать про лабільність стовбурових кровотворних клітин до дії низьких температур і необхідність оптимізації параметрів їх кріоконсервування.

The influence of standard cryopreservation procedure on the viability of different subpopulations of embryonic liver hemopoietic cells was investigated. The viability of cells of the specific phenotype was determined by propidium iodide (PI) staining and labelling with monoclonal antibodies: CD34, CD45, AC133, and Gly-A. The colony-forming activity of human embryonic liver (HEL) suspension was determined by culturing in semisolid medium. The cryopreservation decreases the viability of hemopoietic stem cells (HSC) by 20-30% while the viability of committed erythroid progenitors is decreased by less than 10%. The colony-forming activity of the cryopreserved stem cells demonstrates the validity of the viability values measured. The results obtained testify to the lability of HSC to the effect of low temperatures and appeal for the necessity of an optimisation for their cryopreservation technique.