Кінетика гідролізу Bβ-ланцюга молекули фібриногену, мономерного та полімерного фібрину desА фібриногеназою з отрути Echis multisquamatis

Abstract

Дослiджено кiнетику вiдщеплення 1–42 пептиду Вβ-ланцюга фiбриногену, мономерного й полiмерного фiбрину desА фiбриногеназою з отрути Echis multisquamatis з використанням електрофоретичного та денситометричного методiв визначення швидкостi розщеплення субстрату. Встановлено, що швидкiсть гiдролiзу В -ланцюга зменшується в такому рядi: фiбриноген, мономерний фiбрин, полiмерний фiбрин desА. Кiнетичнi параметри реакцiї становили: KМ 8,0, 9,6, 60 мкмоль/л; kcat 0,13, 0,08, 0,0041 с⁻¹ вiдповiдно вказаного ряду. Зроблено припущення про те, що зменшення спорiдненостi (KМ) та каталiтичної ефективностi гiдролiзу полiмерного фiбрину desА ферментом залежить вiд зменшення концентрацiї доступного субстрату в фiбрилах та вiд залучення B N-домену у взаємодiю з D-регiоном у ходi формування протофiбрил i фiбрил.

Исследована кинетика отщепления 1–42 пептида Вβ-цепи фибриногена, мономерного и полимерного фибрина desА фибриногеназой из яда Echis multisquamatis с использованием электрофоретического и денситометрического методов определения скорости расщепления субстрата. Установлено, что скорость гидролиза В -цепи уменьшается в следующем ряду: фибриноген, мономерный фибрин, полимерный фибрин desА. Кинетические параметры реакции составляли: KM 8,0, 9,6, 60 мкмоль/л; kcat 0,13, 0,08, 0,0041 с⁻¹ соответственно указанного ряда. Сделано предположение, что уменьшение сродства (KM) и каталитической эффективности гидролиза полимерного фибрина desА ферментом связано с уменьшением концентрации доступного субстрата в фибриллах и с вовлечением B N-домена во взаимодействия с D-регионом в ходе формирования протофибрилл и фибрилл.

Kinetics of fibrinogen, monomeric and polymerized fibrin desA 1–42 Вβ-chain peptide cleavage by Echis multisquamatis venom fibrinogenase has been studied using electrophoretic and densitometric methods of substrate cleavage rate determination. It is found that the rate of В -chain hydrolysis decreases in the range: fibrinogen, monomeric and polymerized fibrin desA. Kinetic parameters of the reaction are: KM = 8.0, 9.6, 60 μmol/l; kcat = 0.13, 0.08, 0.0041 s⁻¹ for fibrinogen, monomeric and polymerized desA fibrin, respectively. It is suggested that decreasing the affinity (KМ) and the catalytic efficiency of the enzyme toward the polymeric fibrin desA depends on the decrease of the substrate concentration available in fibrils and on the involvement of B N-domain in the interaction with the D-region during the protofibril and fibril formations.